CLENBUTEROL ELISA

KORTYKOSTEROID
PRZEZNACZENIE
Służy do ilościowego określenia poziomu deksametazonu,
flumetazonu, betametazonu w warunkach in vitro w
próbkach moczu i tkanek (mięśni, wątroby i nerki).
Nr kat.
DM 2156
Płytka Mikrotitracyjna
12 x 8 studzienek
Bufor Rozcieńczająco-Myjący (Stęż.) 1 x 32 ml
Bufor inkubacyjny
2 x 30 ml
Konjugat (Stęż.)
1 fiolka
Substrat Jednoodczynnikowy
1 x 15 ml
Standardy
6 x 0.6 ml
Roztwór Zatrzymujący Reakcję
1 fiolka
Zestaw akcesoriów:
Zestaw kolumienek do rozdziału na podstawie
powinowactw immunologicznego
ZASADA
Studzienki dzielonej na paski płytki mikrotitracyjnej zostały
opłaszczone przeciwciałami specyficznymi dla
deksametazonu, flumetazonu i betametazonu.
Kortykosteroidy, występujące w standardzie lub próbce,
współzawodniczą o ograniczoną liczbę miejsc wiązania
przeciwciał na płytce mikrotitracyjnej ze znakowanym
peroksydazą (z chrzanu) konjugatem kortykosteroidu.
Płytka mikrotitracyjna jest następnie przemyta i zostaje
dodany enzymatyczny substart.
Po okresie inkubacyjnym w temp. pokojowej, którego celem
jest umożliwienie maksymalnego rozwoju reakcji barwnej,
reakcja ta jest zatrzymywana przez dodanie roztworu
zatrzymującego reakcję.
Gęstość optyczna wyznaczana jest przy 450 nm przy
intensywności koloru odwrotnie proporcjonalnej do
koncentracji kortykosteroidu w standardzie czy próbce.
2. Rozcieńczyć 0,05 ml odwirowaną próbkę moczu z 0.45
ml buforem inkubującym ( rozcieńczenie 10 razy)
Tkanki
Zajrzeć do zestawu kolumienek do rozdziału na podstawie
powinowactwa immunologicznego. (Nr Kat. DM 2185)
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
Tylko do prowadzenia badań diagnostycznych w warunkach in vitro. Nie pipetować przy użyciu ust. Zachować typowe środki ostrożności obowiązujące przy kontakcie z odczynnikami stosowanymi w warunkach laboratoryjnych.
Bufor rozcieńczająco-myjący zawiera środek konserwu-jący.
Unikać połknięcia lub kontaktu ze skórą albo błonami
śluzowymi.
Na żądanie dostępne są arkusze danych dotyczących
zdrowia i bezpieczeństwa / Karty charakterystyki substancji
niebezpiecznej.
Odczynniki mogą być używane tylko zgodnie z ich przeznaczeniem, przez odpowiednio wykwalifikowany
personel laboratoryjny, w odpowiednich warunkach
laboratoryjnych.
STABILNOŚĆ I PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
REAKCJI
Płytka mikrotitracyjna (12 X 8 studzienek)
Dostarczana w postaci gotowej do użycia. Zachowuje stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywana w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
Jeżeli używana jest tylko część płytki, należy odłożyć pozostałe paski do foliowej torebki ze środkiem osuszającym
i szczelnie zamknąć, zwracając uwagę na usunięcie nadmiaru powietrza.
Bufor Rozcieńczająco - Myjący (Stęż.)
Rozcieńczyć zawartość buforu rozcieńczająco-myjącego
przy użyciu 970 ml podwójnie destylowanej H2O.
Zachowuje stabilność przez 30 dni w zakresie temperatur
od +2 do +8°C.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Bufor Inkubacyjny
Dostarczana w postaci gotowej do użycia. Zachowuje
stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywana w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
MOCZU
1. Próbkę moczu odwirować przy prędkości 6500 obr./min
przez 5 minut.
Konjugat (Stęż.)
Koniugat dostarczany jako koncentrat. Prosimy zapoznać
się z arkuszem rozcieńczenia konjugatu, gdzie podano
szczegóły dotyczące jego przygotowania. Rozcieńczony
konjugat powinien zostać natychmiast użyty.
Konjugat należy chronić przed działaniem światła.
Substrat Jednoodczynnikowy
Dostarczany w postaci gotowej do użycia. Zachowuje stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywany w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
Nie zawiera żadnych szkodliwych rozpuszczalników organicznych.
Standardy
Dostarczane w postaci gotowej do użycia. Zachowują stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że są
przechowywane w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
Roztwór Zatrzymujący Reakcję
Dostarczany w postaci gotowej do użycia. Zachowuje stabilność do upływu daty ważności, pod warunkiem, że jest
przechowywany w temperaturze w zakresie od +2 do +8°C.
MATERIAŁY DOSTARCZONE
Płytka mikrotitracyjna
Bufor Rozcieńczająco-Myjący
Bufor inkubacyjny
Konjugat (Stęż.)
Substrat jedno odczynnikowy
Standard
Roztwór zatrzymujący reakcję
POTRZEBNE MATERIAŁY, KTÓRE NIE SĄ
DOSTARCZONE
Czytnik płytek mikrotitracyjnych (450 nm)
Pipety : 10 μl do 125 μl
Metoda mycia płytek
Uszczelniacze do płytek
PROCEDURA
Zaleca się, aby przed użyciem wszystkie odczynniki
osiągnęły temperaturę pokojową (+19 do +25°C). W celu
zminimalizowania efektów brzegowych zaleca się, aby
płytka mikrotitracyjna była uszczelniona przy użyciu
przyklejanej uszczelki płytek.
ΑΒΧ
INSTRUKCJA - KLENBUTEROL ELISA - CB 1418
Kiedy wystarczające jest przeprowadzenie testu w
duplikacie, dla płytki testowej zalecany jest układ pokazany
poniżej, przy czym komórki reprezentują dwie studzienki.
S1
T1
T9
T17
T25
T33
S2
T2
T10
T18
T26
T34
S3
T3
T11
T19
T27
T35
S4
T4
T12
T20
T28
T36
S5
T5
T13
T21
T29
T37
S6
T6
T14
T22
T30
T38
QCL
T7
T15
T23
T31
T39
QCE
T8
T16
T24
T32
T40
S = Standard 1 - 6
QC = Kontrola Jakości Niska/Podwyższona
T = Badana Próbka
a) Pipetować do odpowiednich wgłębień płytki mikrotitracyjnej:
b)
Płytkę mikrotitracyjną przykryć folią przylepną .
Standard
Próbka
Kontrola
Konjugat
c)
d)
e)
Standard
Sample
Q.C.
50 μl
75 μl
50 μl
75 μl
50 μl
75 μl
STRONA 2 Z 2
f)
g)
h)
ne) przez okres 15 min. Po końcowym myciu wylać
płyn i wystukać go na bibułkę do całkowitego
wysuszenia wgłębienia.
Natychmiast po myciu przeprowadzić pipetowanie
po 125 μl roztworu substratu jednoodczynnikowego
do każdego wgłębienia przy użyciu wielokanałowej
pipety. Delikatnie wystukać płytkę mikrotitracyjną z obu
stron oraz inkubować przez 20 ± 2 minuty w temperaturze pokojowej (od +19 do +25°C) w ciemności.
Zatrzymać rozwój reakcji barwnej przez dodanie
do każdego wgłębienia po 100 μl Roztworu
Zatrzymującego Reakcję. Powinna być wyraźnie
widoczna zmiana koloru z niebieskiego na żółty.
W ciągu dziesięciu minut od zatrzymania reakcji zmierzyć gęstość optyczną mieszaniny reakcyjnej przy 450
nm.
KRZYWA WZORCOWA I INTERPRETACJA WYNIKÓW
a) Obliczyć średnie absorbancje standardów, materiału
kontrolnego i próbek badanych.
b) Wykreślić absorbancje standardów względem log10
wartości stężeń tych standardów.
c) Dla zmierzonych absorbancji prób badanych i kontrolnych z krzywej wzorcowej odczytać odpowiadające
im stężenia tych prób w ng/ml.
d) Aby uwzględnić rozcieńczenie próbek moczu, wynik z
krzywej wzorcowej należy pomnożyć przez 10.
e) Aby uwzględnić koncentracje dla badanych tkanek w
ng/g wynik z krzywej należy pomnożyć przez 1,7.
Wyniki dodatnie należy potwierdzić inną metodą.
SPECYFICZNO
Reakcyjności krzyżowe przeciwciała przeciwko boldenonowi
pokazano w tabeli zamieszczonej poniżej:
ZWIAZEK
% REAKCYJNOŚCI
KRZYŻOWEJ
Dexametazon
100
Octan dexametazonu 21
162
Fosforan dexametazonu 21
3,6
Flumetazon
501
Betametazon
43
Octan betametazonu 21
0.7
Fosforan betametazonu 21
0.5
Triamcinolon
1.0
Prednisolon
1.7
Kortysol
< 0.5
Kortyson
< 0.5
WARTOŚCI PROGOWE CZUŁOŚCI
Deksametazon
Flumetazon
Betametazon
Mocz
2.5 ng/ml
5.0 ng/ml
5.8 ng/ml
Wydanie poprawione 09/06/03 wpt
Delikatnie postukać płytkę mikrotitracyjną z obu stron
przez kilka sekund przed inkubacją przeprowadzaną
przez 1 godz. w temperaturze pokojowej (w zakresie od
+19 do +25°C).
Odwrócić płytkę i wystukać płyn z wgłębień.
Wymyć płytkę mikrotitracyjną 6 razy przy użyciu
rozcieńczonego buforu rozcieńczająco-myjącego
(po upewnieniu się, że każde wgłębienie jest napełnio-
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: [email protected] Website: www.randox.com
ΑΒΧ
Tkanki
0.25 ng/g
0.5 ng/g
0.6 ng/g