COLtest

ms_06675832190V3.0
COLtest
COLtest
06675824 190
1 x 1.0 mL
06675832 190
3 x 1.0 mL
Polski
Zastosowanie
Test do ilościowego oznaczania in vitro funkcji płytek krwi aktywowanych
kolagenem. Odczynnik jest przeznaczony do oznaczania funkcji płytek w
próbkach pełnej krwi z użyciem analizatora Multiplate.
Podsumowanie
Kolagen jest białkiem znajdującym się w ludzkiej tkance łącznej. Po urazie
tkanki łącznej będącej częścią skóry czy naczyń krwionośnych kolagen
zostaje wystawiony na działanie otoczenia, a wolno krążące płytki
natychmiast łączą się z kolagenem za pośrednictwem ich błonowych
receptorów glikoproteinowych VI.
Po przyłączeniu płytki zmieniają swój kształt, błona uwalnia kwas
arachidonowy, dochodzi do wzrostu stężenia wapnia w cytoplazmie i
uwolnienia z ziarnistości produktów takich jak ADP i serotonina. Obecność
ADP i wolnego wapnia powoduje aktywację kompleksu receptorów
glikoproteinowych IIb/IIIa (GPIIb/IIIa), co prowadzi do łączenia się płytek ze
sobą za pomocą mostków fibrynowych. W związku z tym, że końcowa,
indukowana kolagenem agregacja płytek stanowi kompilację kolagenu,
tromboksanu i płytek aktywowanych ADP, co w efekcie prowadzi do
mediowanej przez GPIIb/IIIa agregacji, wpływ substancji, które hamują ten
tryb aktywacji płytek i ich późniejszej agregacji można wykryć w zależności
od stężenia obecnego kolagenu. Przykładami substancji lub zaburzeń
mogących zmniejszać lub eliminować indukowaną kolagenem agregację
są: kwas acetylosalicylowy (hamowanie cyklooksygenazy), antagoniści
GPIIb/IIIa oraz trombastenia Glanzmanna (niedobór receptorów GpIIb/IIIa).
1,2,3,4,5
Zasada pomiaru
Odczynnik COLtest zawiera kolagen (typu I), który aktywuje płytki poprzez
ich receptory kolagenowe. Po związaniu się kolagenu z receptorami
uwalniany zostaje kwas arachidonowy, będący substratem enzymu
płytkowego cyklooksygenazy. Cyklooksygenza przekształca kwas
arachidonowy w tromboksan A2, będący silnym aktywatorem płytek.
W teście Multiplate Test Cell aktywowane płytki przylegają i agregują na
drucikach czujnika. Prowadzi to do wzrostu oporności pomiędzy drucikami
czujnika, co jest na bieżąco rejestrowane i przedstawione jako pole pod
krzywą (AUC) w jednostkach umownych (AU*min. lub U; konwersja:
1 U = 10 AU*min).6
Odczynniki - roztwory robocze
▪
06675824190
R1: 1 fiolka do sporządzenia 1.0 mL
Liofilizowany odczynnik zawierający kolagen: ekwiwalent aktywności
100 μg/mL.
5 mikroprobówek do porcjowania.
▪
06675832190
R1: 3 fiolki do sporządzenia 1.0 mL
Liofilizowany odczynnik zawierający kolagen: ekwiwalent aktywności
100 μg/mL.
Zalecenia i środki ostrożności
Przeznaczone wyłącznie do celów diagnostyki in vitro.
Należy stosować standardowe procedury postępowania z odczynnikami.
Wszelkie odpady należy usuwać zgodnie z lokalnymi przepisami.
Karta charakterystyki produktu dostępna na życzenie.
Unikać spienienia odczynników i próbek (materiału od pacjentów,
kalibratorów i kontroli).
Postępowanie z odczynnikami
Ostrożnie rozpuścić zawartość fiolki R1 poprzez dodanie 1.0 mL wody
destylowanej lub dejonizowanej. Delikatnie wymieszać R1 i pozostawić
fiolkę zamkniętą na 10 minut w temp. 18‑25 °C. Obracać delikatnie fiolkę do
momentu uzyskania jednorodnego roztworu. Unikać tworzenia się piany.
Aby osiągnąć maksymalną stabilność po rekonstytucji, odpipetować
≥ 100 µL porcje odczynnika do mikroprobówek potrzebne w ciągu dnia.
2015-02, V 3.0 Polski
Multiplate
Przechowywanie i trwałość
Przechowywać w temperaturze 2‑8 °C.
Liofilizowane odczynniki pozostają stabilne do podanej daty ważności. Jeśli
rekonstytuowane odczynniki nie zostaną podzielone na porcje do
mikroprobówek, oryginalną fiolkę należy przechowywać w pozycji pionowej.
Stabilność rekonstytuowanego kalibratora:
w temp. 18‑25 °C
24 godz.
w temp. 2‑8 °C:
7 dni
Zabezpieczyć odczynnik przed wpływem światła słonecznego i
podwyższonej temperatury.
Pobieranie i przygotowanie materiału
Sprawdzono i zaakceptowano możliwość stosowania jedynie materiałów
biologicznych wymienionych poniżej. krew pełna:
Do pobierania próbek używać standardowych probówek i stosować się do
instrukcji ich producenta. Pobieranie krwi należy przeprowadzić tak, by
uniknąć przedłużonego zastoju krwi żylnej i używając igły o dużym
przekroju. Unikać tworzenia się piany w probówce do pobrań.
Dokładnie wymieszać zawartość delikatnie odwracając probówkę.7
Nie zamrażać ani nie przechowywać w chłodziarce. Nie ogrzewać krwi
przed analizą.8
Antykoagulanty stosowane podczas pobierania krwi mają znaczący wpływ
na wyniki testu.8 Zaleca się stosowanie dostępnych w handlu probówek
hirudynizowanych.7,9
Alternatywnie można użyć standardowych probówek litowo-heparynowych
lub cytrynianowych (3.2 % cytrynianu).10,11
Aby uniknąć zbyt dużego stężenia cytrynianu zawsze należy upewnić się,
że probówki cytrynianowe napełnione są do wskazanego poziomu.
System pobierania krwi musi być wystandaryzowany w każdym ośrodku.
Porównanie wyników próbek pobranych od danego pacjenta z zakresem
referencyjnym możliwe jest jedynie wtedy, jeśli próbkę pobierano na ten
sam antykoagulant (tj. heparynę litową lub hirudynę).
Próbki powinno analizować się w czasie 0.5‑3 godzin od pobrania.8
Materiały dostarczone w zestawie
▪ Patrz "Odczynniki - roztwory robocze" w części o odczynnikach.
Niezbędne materiały dodatkowe (niedostarczone w zestawie)
▪
06675697190, Aliquot Vials for COLtest
▪
06675751001, Hirudin Blood Tubes, 50 probówek
▪
06675760001, Hirudin Blood Tubes, 10 probówek
▪
06675972190, NaCl/CaCl2 Solution
▪
06675913190, ASA Reagent, 1 x 1.0 mL
▪
06675921190, ASA Reagent, 3 x 1.0 mL
▪
06675590001, Test Cells, 6 x 10 sztuk
▪ Roztwór soli, 0.9 %
▪ Analizator Multiplate. Dodatkowe wyposażenie, zob. instrukcja obsługi
analizatora i skrócona instrukcja obsługi analizatora
▪ Woda destylowana lub dejonizowana
▪ Ogólne wyposażenie laboratoryjne
Oznaczenie
W celu optymalnego działania testu należy stosować się do zaleceń
zawartych w niniejszej ulotce dotyczących konkretnego analizatora. Należy
postępować zgodnie z poniższą instrukcją obsługi dla operatora,
uwzględniając typ aparatu.
Wszelkie zmiany w aplikacji nie zatwierdzone przez firmę Roche nie
podlegają gwarancji i muszą być zdefiniowane przez użytkownika.
Umieścić R1 i próbki na wyznaczonych pozycjach.
1/3
ms_06675832190V3.0
COLtest
COLtest
Procedura testu dla krwi hirudynizowanej lub pobranej na heparynę
litową:
Roztwór soli, 0.9 % (ogrzany do temp. 37 °C)
300 μL
Próbka (18‑25 °C)
300 μL
Oznaczenie przeprowadzono na ogółem trzech próbkach krwi używając dla
każdej próbki tego samego urządzenia i tych samych fiolek odczynnika.
Uzyskano następujące wyniki:
Próbka
Średnia AUC [U]
OS AUC [U]
WZ
118
7
6 %
Inkubacja
180 sekund
Próbka 1
R1
20 μL
Próbka 2
88
4
5 %
6 minut
Próbka 3
105
5
5 %
Czas pomiaru
Procedura dla krwi pobranej na cytrynian:
Roztwór NaCl/CaCl2 (ogrzany do 37 °C)
300 μL
Próbka (18‑25 °C)
300 μL
Inkubacja
180 sekund
R1
20 μL
Czas pomiaru
6 minut
Końcowe stężenie kolagenu dorównuje aktywności 3.2 µg/mL.
Należy dokładnie stosować czas i temperaturę inkubacji. W wypadku
stosowania pipety elektronicznej należy postępować według instrukcji
podawanych przez oprogramowanie analizatora Multiplate.
Kontrola jakości
Do kontroli aktywności i stabilności odczynnika można użyć próbki krwi
prawidłowej.
Patologicznie hamowaną agregację można osiągnąć dodając odczynnik
ASA Reagent.
Należy postępować według dołączonej ulotki metodycznej.
Procedury kontroli jakości należy stosować zgodnie z właściwymi
zaleceniami organów państwowych oraz lokalnymi wytycznymi.
Ograniczenia - substancje interferujące
Upośledzenie czynnościowe płytek zaobserwowano po spożyciu różnych
leków i preparatów ziołowych.12 Agregacja może być nieprawidłowa u
pacjentów z trombocytopenią.13
Użycie nieogrzanego roztworu soli lub skrócenie czasu inkubacji może
doprowadzić do uzyskania fałszywych wyników. Roztwór soli nie może
zawierać żadnych dodatków, takich jak np. ester metylowy.
Brak wolnych receptorów GpIIbIIIa (np. w tromoboastenii Glanzmana) może
prowadzić do osłabienia agregacji.4,5
Spożywanie kwasu acetylosalicylowego lub inkubacja próbki in vitro z
kwasem acetylosalicylowym prowadzi do hamowania agregacji.1
Dla celów diagnostycznych wyniki powinny być interpretowane z
uwzględnieniem historii choroby, badań klinicznych oraz innych danych o
pacjencie.
Wartości oczekiwane
Wartości oczekiwane ustalono w badaniu, w którym wzięło udział
53 zdrowych dawców, z użyciem probówek Roche Hirudin Blood Tubes.
Wynik (5. do 95. percentyla):
COLtest
AUC [U]
72-125
Uwaga: W celu ustalenia wartości preferencyjnych dawcom nakazano w
ciągu 10 dni poprzedzających badanie nieprzyjmowanie kwasu
acetylosalicylowego, niesterydowych leków przeciwzapalnych (NLPZ) oraz
antagonistów receptorów ADP.14
W oparciu o populację pacjentów każde laboratorium powinno określić
poziom wartości oczekiwanych lub wyznaczyć własne zakresy wartości
referencyjnych.
Szczegółowe dane o teście
Reprezentatywne dane uzyskane przy użyciu analizatorów Multiplate
podano poniżej. Wyniki uzyskane w poszczególnych laboratoriach mogą się
różnić.
Precyzja
Precyzję określono oznaczając próbkę pełnej krwi hirudynizowanej w
dwóch aparatach we wszystkich kanałach (tj. ogółem 10 oznaczeń).
Wyliczono średnią, odchylenie standardowe i współczynnik zmienności.
Literatura
1 Pulcinelli FM, Pignatelli P, Celestini A,et al. Inhibition of platelet
aggregation by acetylsalicylic acid progressively decreases in long-term
treated patients. J Am Coll Cardiol, 2004; 43:979-984
2 Storey RF, Wilcox RG, Heptinstall S. Differential Effects of Glycoprotein
IIb/IIIa Antagonists on Platelet Microaggregate and Macroaggregate
Formation and Effect of Anticoagulant on Antagonist Potency.
Circulation. 1998;98:1616-1621
3 Moshfegh K, Redondo M, Julmy F et al.. Antiplatelet effects of
clopidogrel compared with acetylsalicylic acid after myocardial
infarction: enhanced inhibitory effects of combination therapy. J Am
Coll Cardiol, 2000; 36:699-705
4 Awidi A, Maqablah A, Dweik M, et al. Comparison of platelet
aggregation using light transmission and multiple electrode
aggregometry in Glanzmann thrombasthenia. Platelets 2009 Aug;
20(5):297-301.
5 Halimeh S, Angelis G, Sander A, et al. Multiplate Whole Blood
Impedance Point of Care Aggregometry: Preliminary Reference Values
in Healthy Infants, Children, and Adolescents. Klin Padiatr 2010; 222:
158-163.
6 Sibbing D, Braun S, Jawansky S, et al. Assessment of ADP-induced
platelet aggregation with light transmission aggregometry and multiple
electrode platelet aggregometry before and after clopidogrel treatment.
Thromb Haemost 2008; 99: 121-126.
7 CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline.
CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute;
2008.
8 Kaiser AF, Neubauer H, Franken CC, et al. Which is the best
anticoagulant for whole blood aggregometry platelet function testing?
Comparison of six anticoagulants and diverse storage conditions.
Platelets. 2011 Oct 14.
9 Jambor C, Weber CF, Gerhardt K, et al. Whole Blood Multiple
Electrode Aggregometry Is a Reliable Point-of-Care Test of
acetylsalicylic acid-Induced Platelet Dysfunction. Anesth Analg
2009;109:25-31.
10 Rahe-Meyer N, Winterhalter M, Boden A, et al. Platelet concentrates
transfusion in cardiac surgery and platelet function assessment by
multiple electrode aggregometry. Acta Anaesthesiol Scand 2009
Feb;53(2):168-75.
11 Pedersen SB, Grove EL, Nielsen HL, et al. Evaluation of acetylsalicylic
acid response by Multiplate whole blood aggregometry and light
transmission aggregometry. Platelets 2009 Sep;20(6):415-20.
12 CLSI. Platelet Function Testing by Aggregometry; Approved Guideline.
CLSI document H58-A. Clinical and Laboratory Standards Institute;
2008, p.31.
13 Hanke AA, Roberg K, Monaca E et al. Impact of platelet count on
results obtained from multiple electrode platelet aggregometry
(Multiplate). Eur J Med Res 2010 May 18;15(5):214-9.
14 CLSI. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the
Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition. CLSI document
C28-A3. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.
W celu uzyskania dalszych informacji należy zapoznać się z dokumentacją
dla danego analizatora, instrukcją obsługi lub skróconą instrukcją obsługi
analizatora Multiplate, ulotką aplikacyjną, informacją o produkcie lub
ulotkami produktowymi dołączonymi do opakowań.
W niniejszej ulotce metodycznej jako separatora dziesiętnego,
oddzielającego liczbę całkowitą od części dziesiętnych ułamka dziesiętnego
stosuje się zawsze kropkę. Separatorów oddzielających tysiące nie używa
się.
2/3
2015-02, V 3.0 Polski
ms_06675832190V3.0
COLtest
COLtest
Symbole
Oprócz znaków zawartych w standardzie ISO 15223‑1, firma Roche
Diagnostics używa następujących symboli i znaków.
Zawartość zestawu
Analizatory/aparaty, w których można zastosować
odczynniki
Odczynnik
Objętość po rekonstytucji lub wymieszaniu
Globalny Numer Jednostki Handlowej
GTIN
Istotne dodatki oraz zmiany zostały oznaczone na marginesie.
© 2014, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim
www.roche.com
2015-02, V 3.0 Polski
3/3