Gram-ujemny QuickFISH™ BC

Badanie umożliwia szybką identyfikację pałeczek okrężnicy (E. coli),
pałeczek ropy błękitnej (P. aeruginosa) oraz pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae) na rozmazach wykonanych z pozytywnych posiewów
krwi.
Zasada postępowania
Mieszanina znakowanych fluoresceiną sond PNA charakterystycznych
dla pałeczek okrężnicy (E. coli), znakowanych tetrametylorodaminami
sond PNA charakterystycznych dla pałeczek ropy błękitnej
(P. aeruginosa) oraz znakowanych fluoresceiną i tetramethylrhodaminą
sond PNA charakterystycznych dla Pałeczki zapalenia płuc
(K. pneumoniae) są dodawane do rozmazu wykonanego z dodatniego
posiewu krwi. Hybrydyzacja przeprowadzana jest w temp. 55°C przez
15 minut, a rozmaz jest badany za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.
Gram-ujemny QuickFISH™ BC
Pałeczki okrężnicy (Escherichia coli),
pałeczki zapalenia płuc
(Klebsiella pneumoniae)
oraz pałeczki ropy błękitnej
(Pseudomonas aeruginosa)
Zestaw do identyfikacji posiewów
C
V
X
h
Odczynniki
Zestaw Gram-ujemny QuickFISH BC FISH składa się z następujących
elementów:
Gram-ujemny niebieski roztwór PNA
0,85 ml sonda PNA w roztworze
Gram-ujemny niebieski PNA
hybrydyzacyjnym. Zawiera 15%
formamidu.
25
Gram-ujemny żółty PNA
QFGNRBC1-25
Środki ostrożności
V
Przeznaczenie
Do diagnozowania in vitro.
Wyłącznie do profesjonalnego użytku, do stosowania przez personel
przeszkolony w zakresie technik laboratoryjnych i doświadczony
w zakresie mikroskopii fluoroscencyjnej.
Gram-ujemna QuickFISH BC to wielokolorowy test jakościowy
hybrydyzacji kwasów nukleinowych, przeznaczony do identyfikacji
pałeczek okrężnicy (Escherichia coli) i/lub pałeczek ropy błękitnej
(Pseudomonas aeruginosa) i/lub pałeczek zapalenia płuc (Klebsiella
pneumoniae) na rozmazach wykonanych z pozytywnych posiewów krwi
zawierających Gram-ujemne pałeczki bacilli przy barwieniu metodą
Grama.
Środki bezpieczeństwa
Gram-ujemny niebieski i żółty roztwór PNA zawierają 15% formamidu.
Mogą działać szkodliwie na dziecko w łonie matki. Chronić przed
dziećmi. Unikać narażenia - przed użyciem zapoznać się ze specjalnymi
środkami ostrożności. Karta charakterystyki substancji niebezpiecznej
jest dostępna na żądanie.
Przeprowadzenie podhodowli pozytywnych posiewów krwi jest konieczne
do odzyskania drobnoustrojów celem przebadania czułości i/lub
różnicowania mieszanego wzrostu.
QuickFix-1 zawiera 24% etanolu: drażniący dla oczu i skóry. Pary mogą
wywoływać uczucie senności i zawroty głowy. Karta charakterystyki
substancji niebezpiecznej jest dostępna na żądanie. Środek dostępny
w zestawie utrwalającym QuickFISH.
Użycie Gram-ujemnego zestawu QuickFISH BC jest wskazane jako
pomoc w diagnostyce bakteriemii wywołanej przez pałeczki okrężnicy
(E. coli) i/lub pałeczki zapalenia płuc (K. pneumoniae) i/lub pałeczki ropy
błękitnej (P. aeruginosa).
V
Gram-ujemny żółty roztwór PNA
0,85 ml sonda PNA w roztworze
hybrydyzacyjnym. Zawiera 15%
formamidu.
QuickFix-2 zawiera 97% metanolu: wysoce łatwopalny. Działa toksycznie
przez drogi oddechowe, w kontakcie ze skórą i po połknięciu. Karta
charakterystyki substancji niebezpiecznej jest dostępna na żądanie.
Środek dostępny w zestawie utrwalającym QuickFISH.
Zapewnić ochronę przed zagrożeniem mikrobiologicznym.
Do diagnozowania in vitro.
Podsumowanie i wyjaśnienie
Nie jeść, nie pić, nie palić, nie stosować kosmetyków, nie przechowywać
ani nie przygotowywać żywności w wyznaczonym miejscu pracy.
Pałeczki okrężnicy (E. coli), pałeczki ropy błękitnej (P. aeruginosa) oraz
pałeczki zapalenia płuc (K. pneumoniae) są uważane za przyczyny
bakteriemii nabytej pozaszpitalnie lub w szpitalu.
Usuwać odczynniki zgodnie z krajowymi, wojewódzkimi i miejscowymi
przepisami.
Techniczne środki ostrożności
Identyfikacja pałeczek okrężnicy (E. coli), pałeczek ropy błękitnej
(P. aeruginosa) oraz pałeczek zapalenia płuc (K. pneumoniae)
w posiewach krwi opiera się rutynowo na identyfikacji wstępnej jako
Gram-ujemnych pałeczek bacilli (GNB), po której następuje ostateczna
identyfikacja po wykonaniu podhodowli i analizy biochemicznej (1).
Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności
wydrukowanego na etykietach.
Odczynniki dostarczone są w stałych stężeniach. Wszelka modyfikacja
odczynników lub ich przechowywanie w warunkach niezgodnych
z zaleceniami podanymi w punkcie „Przechowywanie i przygotowywanie
elementów zestawu” może negatywnie wpłynąć na wyniki analizy.
Gram-ujemny QuickFISH to wielokolorowy test fluorescencyjnej
hybrydyzacji in situ (FISH), wykorzystujący sondy hybrydyzacyjne PNA
do wykrywania sekwencji rybosomowych RNA charakterystycznych dla
pałeczek okrężnicy (E. coli), pałeczek ropy błękitnej (P. aeruginosa) oraz
pałeczek zapalenia płuc (K. pneumoniae), wliczając w to trzy podgatunki:
pneumoniae, ozaenae oraz rhinoscleromatis.
Unikać mikrobiologicznego skażenia odczynników.
Unikać wszelkiego krzyżowego skażenia próbek i odczynników,
ponieważ może to prowadzić do uzyskania błędnych wyników.
1
Nie dopuścić, aby końcówka pipety dotykała rozmazu, ponieważ może to
spowodować krzyżowe skażenie materiału z różnych szkiełek
mikroskopowych lub skażenie odczynnika.
 Niezwłocznie umieścić kroplę QuickFix-1 na próbce i równomiernie ją
rozprowadzić na całym obszarze próbki za pomocą plastikowej igły
do posiewu. Uważać, by nie tworzyły się pęcherzyki powietrza.
Przy każdej próbce należy używać nowej końcówki pipety oraz igły
do posiewu.
 Pozostawić rozmaz do wysuszenia (1-3 minut). Rozmaz powinien być
widocznie suchy.
Nie stosować filtrów mikroskopowych innych niż filtry marki AdvanDx
(AC007).
 Dodać dwie krople QuickFix-2 na środek obszaru próbki. Patrz
odnośnik  na schemacie Nr 1 szkiełka QuickFISH.
Nie stosować szkiełek mikroskopowych innych niż szkiełka QuickFISH
Slides (CS012).
 Pozostawić rozmaz do wysuszenia (~1 minuty). Rozmaz powinien być
widocznie suchy.
Należy pamiętać, aby uchwyt na szkiełka AdvanDx SlideStation 10 był
wypoziomowany i zrównoważony do temp. 55 ± 1°C przed rozpoczęciem
procedury badania.
 Utrwalony rozmaz QuickFISH może być pozostawiony
na podgrzewaczu szkiełek w temp. 55 ± 1°C przez maksymalnie
5 minut. Przygotowane rozmazy nieużyte w ciągu 5 minut mogą być
przechowywane w temperaturze pokojowej do momentu badania,
jeżeli okres oczekiwania nie przekracza 1 godziny, lub w temp. 2-8°C,
jeżeli okres oczekiwania na badanie nie przekracza 1 dnia.
Ważne jest, aby mikroskop właściwie funkcjonował. Należy upewnić się,
że żarówka mikroskopu jest odpowiednio ustawiona i nie przekroczyła
podanego okresu ważności.
Schemat szkiełka QuickFISH:
Źródła światła inne niż wysokociśnieniowa łukowa lampa rtęciowa nie
odznaczają się na ogół odpowiednim spektrum emisji ani natężeniem
oświetlenia, a w związku z tym nie zaleca się ich stosowania. Przed
podaniem wyników odnoszących się do jakiegokolwiek źródła światła,
należy się upewnić, że kontrola pozytywna prawidłowo wyświetla trzy
odrębne barwy fluorescencyjne: zieloną, czerwoną i żółtą.
Przechowywanie i przygotowywanie elementów
zestawu
Aby zapewnić uzyskanie optymalnych wyników za pomocą zestawu, jego
elementy składowe powinny być przechowywane zgodnie
z następującymi instrukcjami:
Elementy składowe zestawu należy przechowywać w temp. 2-8°C.
Przechowywać butelki w pozycji pionowej i dokręcać nakrętki po użyciu.
Dostarczone odczynniki są gotowe do użycia.
Procedura testu
Szkiełka mikroskopowe QuickFISH są szczelnie zamknięte
w oddzielnych torebkach z azotem i środkiem osuszającym.
Przechowywać szkiełka mikroskopowe w temp. 2-8°C. Szkiełka
mikroskopowe powinny być użyte natychmiast po zerwaniu szczelnego
zamknięcia torebki. Nie używać szkiełek mikroskopowych po upływie
terminu ważności.
Dostarczony materiał
Gram-ujemny QuickFISH BC
QFGNRBC1-25
Każdy zestaw zawiera materiał wystarczający do przeprowadzenia
25 testów. Dostarczone odczynniki są gotowe do użycia. Data ważności
zestawu jest podana na etykiecie zewnętrznego pudełka.
Pobieranie i przygotowywanie próbki
Wymagany materiał dostępny w firmie AdvanDx.
Przygotowanie Gram-ujemnych rozmazów QuickFISH
Gram-ujemny QuickFISH BC nie jest kompatybilny z podłożami
do posiewu krwi zawierającymi węgiel ani z butelkami z posiewem krwi
VersaTREK REDOX 2
Duże szkiełka nakrywkowe 50 x 24 mm numer 1.
Szklane szkiełko nakrywkowe
Filtr mikroskopowy AdvanDx Dwuzakresowy filtr
 Należy postępować zgodnie z instrukcjami producenta posiewu krwi,
aby odpowiednio zmieszać posiew krwi w butelce przed wykonaniem
rozmazu.
Uchwyt na szkiełka AdvanDx SlideStation 10
Podgrzewacz do szkiełek (55 ± 1°C).
AC028
Uchwyt na szkiełka nakrywkowe QuickFISH do mieszania
AC030
Może pomieścić do 3 szkiełek przykrywkowych celem zmieszania Gramujemnego żółtego odczynnika PNA z niebieskim
 Szkiełko mikroskopowe należy umieścić na uchwycie na szkiełka
SlideStation w temp. 55 ± 1°C. W przypadku wielu próbek należy
upewnić się, że szkiełka mikroskopowe nawzajem się nie dotykają,
aby uniknąć skażenia.
Pipeta AdvanDx 10 µl Pipeta o stałej pojemności 10 µL.
Szkiełko QuickFISH
Szkiełko mikroskopowe QuickFISH z kontrolami
QuickFix-1 Pierwotny roztwór utrwalający*
QuickFix-2 Wtórny roztwór utrwalający*
 Nie dopuścić, aby końcówka pipety dotykała rozmazu, ponieważ może
to spowodować krzyżowe skażenie materiału z różnych szkiełek
mikroskopowych lub skażenie odczynnika.
 Dodać 1 lub więcej kropli próbki posiewu krwi do wtórnego naczynia
(np. probówki mikrowirówkowej).
Fiołka filtracyjna AdvanDx
AC027
AC007
AC029
CS012
CP0169
CP0170
AC008
* SzkiełkoQuickFISH, QuickFix-1 oraz QuickFix-2 są dostarczone wraz
z zestawem utrwalającym QuickFISH.
o W przypadku próbek zawierających kuleczki żywicy – należy
dodać 10 lub więcej kropli próbki do fiolki filtracyjnej
AdvanDx. Nie przekraczać górnej granicy wypełnienia.
Włożyć tłok filtra do fiolki i przesunąć go do końca celem
usunięcia kuleczek żywicy.
Wymagany, ale niedostarczony materiał
 Mikroskop fluorescencyjny wyposażony w obiektyw immersyjny
o powiększeniu 60x lub 100x oraz wysokociśnieniowe łukowe lampy
rtęciowe lub równoważne źródło światła.
o Zdjąć wieczko z fiolki filtracyjnej AdvanDx, aby uzyskać
dostęp do próbki i przygotować rozmaz.
 Olejek immersyjny. Powinien być zgodny z obiektywem
mikroskopowym i niewykazujący fluorescencji.
 Upewnić się, że próbka posiewu krwi jest właściwie wymieszana.
Za pomocą pipety AdvanDx 10 µl przenieść 10 µl próbki na środek
obszaru próbki szkiełka QuickFISH. Patrz odnośnik  na schemacie
Nr 1 szkiełka QuickFISH.
 Końcówki do pipet
2
 Plastikowe igły do posiewu.
Materiał kontrolny powinien być przetestowany zgodnie z wytycznymi lub
wymaganiami przepisów miejscowych, wojewódzkich i/lub krajowych,
bądź organizacji akredytujących.
Procedura analizy:
Rozmazy QuickFISH powinny być przebadane natychmiast po ich
utrwaleniu; jednak w przypadku przechowywania ich w temp. 2-8 °C lub
w temperaturze pokojowej, należy umieścić je na podgrzewaczu szkiełek
na ok. 5 minut w temp. 55 ± 1°C przed dodaniem odczynników
hybrydyzacji.
Stosować szkiełka mikroskopowe z kontrolami QuickFISH (CS012).
Szkiełka mikroskopowe QuickFISH są szczelnie zamknięte
w oddzielnych torebkach z azotem i środkiem osuszającym.
Przechowywać szkiełka mikroskopowe w temp. 2-8°C. Szkiełka
mikroskopowe powinny być użyte natychmiast po zerwaniu szczelnego
zamknięcia torebki. Nie używać szkiełek mikroskopowych po upływie
terminu ważności.
Należy pamiętać, aby uchwyt na szkiełka AdvanDx SlideStation-10 był
wypoziomowany i zrównoważony do temp. 55 ± 1°C przed rozpoczęciem
procedury badania.
Należy korzystać z wyświetlacza cyfrowego i termometru
powierzchniowego (dostarczonych wraz z zestawem), aby się upewnić,
że temperatura uchwytu na szkiełka SlideStation 10 wynosi 55 ± 1°C.
Kontrola pozytywna wykaże liczne pałeczki bacilli o zielonym,
czerwonym lub żółtym zabarwieniu fluorescencyjnym. Negatywna
kontrola nie będzie zawierać komórek o zabarwieniu fluorescencyjnym.
Pozytywne (POS, +) i negatywne (NEG, -) zagłębienia kontrolne
zawierają organizmy reprezentatywne dla wszystkich zestawów
AdvanDx QuickFISH BC. Organizmy kontrolne z innych zestawów mogą
być słabo widoczne (bez fluorescencyjnego zabarwienia) zarówno
w pozytywnych jak i negatywnych zagłębieniach kontrolnych.
Hybrydyzacja
 Umieścić szkiełko nakrywkowe w jednym z rowków uchwytu
QuickFISH przeznaczonego do mieszania. Patrz Schemat Nr 1.
 Odwrócić i przytrzymać każdą butelkę, aby umożliwić utworzenie
się kropli w kroplomierzu, a dopiero wtedy ścisnąć butelkę, aby
uniknąć utworzenia się piany w mieszaninie hybrydyzacyjnej.


Morfologia komórek może się różnić między próbkami i kontrolami
ze względu na naturalne odchylenia.
Jeżeli wyniki pozytywnych i negatywnych kontroli nie są zgodne
z poniższą interpretacją wyników, wyniki badania będą nieważne i nie
należy ich zapisywać w karcie pacjenta.
Dodać kroplę Gram-ujemnego niebieskiego roztworu PNA
na środek szkiełka nakrywkowego. Uwaga: owalne wycięcie
rowka uchwytu QuickFISH przeznaczonego do mieszania
wskazuje środek szkiełka nakrywkowego. Umieścić jedną kroplę
Gram-ujemnego żółtego roztworu PNA bezpośrednio
na wierzchu pierwszej kropli. Uważać, by nie tworzyły się
pęcherzyki powietrza. Patrz Schemat Nr 1.
Ustawianie kontroli:
Wyrównać środek obiektywu mikroskopu za pomocą punktów
pozytywnego zagłębienia kontrolnego POS (+) na preparacie QuickFISH
(Patrz schemat szkiełka QuickFISH). Przesunąć szkiełko do przodu lub
do tyłu, tak aby zielony kontur zagłębienia pojawił się w polu widzenia.
Użyć śruby mikrometrycznej, aby wyostrzyć obraz zielonego konturu
zagłębienia (to jest prawidłowa płaszczyzna ogniskowa do odczytywania
szkiełek mikroskopowych). Przesunąć obiektyw do środkowej części
wybranego, pozytywnego zagłębienia kontrolnego POS. Aby zobaczyć
negatywną kontrolę (NEG), należy przesunąć obiektyw w bok, do środka
negatywnego zagłębienia kontrolnego NEG. Kontynuować ruch w bok,
aby dojść do pola widzenia zagłębienia próbki.
Dokładnie wymieszać niebieski PNA z żółtym za pomocą
plastikowej igły do posiewu, aż do uzyskania jednolitego
zielonego koloru albo pozostania nieokreślonego niebieskiego
lub żółtego koloru. Rozprowadzić wzdłużnie celem wypełnienia
owalnego wzornika. Patrz Schemat Nr 2.
Schemat Nr 1
Schemat Nr 2
Uwagi dotyczące procedury
Główne systemy posiewów krwi oraz zgodność rodzajów butelek:
Platforma QuickFISH jest kompatybilna z dostępnymi na rynku
systemami stałego monitorowania posiewów krwi oraz rodzajami butelek,
za wyjątkiem butelki z dodatkiem węgla oraz butelki anaerobowej
VersaTREK Redox 2. Przebadano następujące rodzaje butelek:
Klinicznie:
BacT/Alert (SA, SN), BACTEC (lityczna 10 anaerobowa, aerobowa plus,
aerobowa standardowa 10)
 Nałożyć szkiełko nakrywkowe i docisnąć je, wyrównując
krawędzie zgodnie ze znacznikami na szkiełku podstawowym.
Szkiełko nakrywkowe powinno się mieścić między znacznikami.
Jeżeli szkiełko nakrywkowe znajduje się na białym, matowym
obszarze, test może zakończyć się niepowodzeniem ze względu
na niewystarczający przepływ odczynników.
Analitycznie:
 Poddać inkubacji przez 15-20 minut w temp. 55 ± 1°C.
Aerobowa VersaTREK REDOX 1, BACTEC (Plus anaerobowa,
aerobowa standardowa 10, anaerobowa/standardowa F, pediatryczna
Peds Plus). Nie zostały oszacowane wyniki uzyskane za pomocą
zestawu Gram-ujemnego QuickFISH BC przy użyciu tych rodzajów
butelek z posiewami krwi.

Uwaga: Unikać krzyżowego skażenia butelek. Umieścić każde
wieczko kroplomierza na właściwej butelce.
Kontrola temperatury:

Sprawdzić szkiełka zgodnie z poniższym opisem

Uwaga: Unikać krzyżowego skażenia butelek. Umieścić każde
wieczko kroplomierza na właściwej butelce.

Sprawdzić szkiełka zgodnie z poniższym opisem.
Należy pamiętać, aby uchwyt na szkiełka AdvanDx SlideStation 10 był
wypoziomowany i zrównoważony do temp 55 ± 1°C przed rozpoczęciem
procedury badania
Interpretacja wyników
Preparaty powinny być ocenione w ciągu 2 godzin po hybrydyzacji.
Nie wystawiać szkiełek na bezpośrednie działanie promieni
słonecznych czy też silnego źródła światła, ponieważ może to
spowodować wygaszenie fluorescencji.
Kontrola jakości
Kontrola jakości powinna być przeprowadzona przy każdym wykonaniu
testu fluorescencyjnego.
3
Przeanalizować szkiełka za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego
wyposażonego w filtr mikroskopowy formy AdvanDx. Tło rozmazu jest
czerwonawe. Pałeczki okrężnicy (E. coli) są widoczne w postaci licznych
pałeczek bacilli o jasnym zielonym zabarwieniu fluorescencyjnym w wielu
polach widzenia, podczas gdy pałeczki ropy błękitnej (P. aeruginosa) są
widoczne w postaci licznych pałeczek bacilli o jasnym czerwonym
zabarwieniu fluorescencyjnym w wielu polach widzenia, a pałeczki
zapalenia płuc (K. pneumoniae) są widoczne w postaci licznych pałeczek
bacilli o jasnym żółtym zabarwieniu fluorescencyjnym w wielu polach
widzenia. Gram-ujemne pałeczki bacilli, inne niż pałeczki okrężnicy (E.
coli), pałeczki zapalenia płuc (K. pneumoniae) i pałeczki ropy błękitnej
(P. aeruginosa), nie wykazują fluorescencji. Unoszące się organizmy lub
zanieczyszczenia nie powinny być interpretowane czy też mylone
z pozytywnymi organizmami.
 Butelki anaerobowe BACTEC Plus oraz pediatryczne BACTEC Peds
Plus nie zostały dokładnie ocenione w trakcie badań klinicznych,
dlatego też nie ustalono w odpowiedni sposób wyników, jakie mogą
przynieść
 Wyniki uzyskane przy użyciu butelek z posiewami krwi VersaTREK
REDOX 1 oraz BACTEC (aerobowa standardowa 10, anaerobowa/
standardowa F) zostały oszacowane jedynie w badaniu zgodności
do użytku wewnętrznego. Dlatego też nieznane są wyniki, jakie mogą
dawać.
 Fałszywie pozytywna zielona autofluorescencja może wystąpić
w przypadku użycia standardowego filtra FITC zamiast filtra
mikroskopowego firmy AdvanDx.
 Fałszywie negatywne wyniki mogą sporadycznie wystąpić z powodu
mieszanego wzrostu lub błędu w technice badania.
 Rodzaj, a także stan używanego instrumentarium wpływa na wygląd
uzyskanego obrazu. Fluorescencja może się różnić zależnie od
rodzaju używanego mikroskopu, źródła światła oraz poziomu rRNA
w komórkach. Każde laboratorium powinno ustalić swoje własne
kryteria do odczytywania wyników, przy zastosowaniu własnych
kontroli.
Przykłady reprezentatywne: zielony pozytywny wynik pałeczek okrężnicy
(E. coli) (u góry po lewej); żółty pozytywny wynik pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae) (u góry pośrodku); czerwony pozytywny wynik pałeczek
ropy błękitnej (P. aeruginosa) (u góry po prawej); mieszany zielony
pozytywny wynik pałeczek okrężnicy (E. coli), żółty pozytywny wynik
pałeczek zapalenia płuc (K. pneumoniae) i czerwony pozytywny wynik
pałeczek ropy błękitnej (P. aeruginosa) (u dołu po lewej). Negatywne
wyniki testu z czerwonawym tłem (u dołu pośrodku).
 Fałszywie negatywny wynik pałeczek zapalenia płuc (K. pneumoniae)
lub fałszywie pozytywny zielony wynik, prowadzące do błędnego
rozpoznania pałeczek zapalenia płuc (K. pneumoniae jako pałeczek
okrężnicy (E.Coli), mogą wystąpić w przypadku użycia innego źródła
światła niż wysokociśnieniowa łukowa lampa rtęciowa, takiego jak
zmodyfikowana łukowa lampa rtęciowa (metalohalogenkowa) lub
dioda elektroluminescencyjna.
Rozwiązywanie problemów
 Należy dokonać izolacji na podłożach stałych w celu zróżnicowania
mieszanego wzrostu z innymi organizmami i zidentyfikowania
pozytywnych posiewów krwi, dających negatywne wyniki FISH.
Fałszywie pozytywne i/lub negatywne wyniki kontroli oraz badania próbki
mogą być uzyskane, jeśli nie stosuje się filtra mikroskopowego firmy
AdvanDx (AC007) lub w razie skażenia próbek.
 Niniejszy produkt nie został zatwierdzony do użycia z próbkami
innymi niż posiewy krwi.
Fałszywie negatywne wyniki kontroli lub badania próbki mogą być
uzyskane, jeśli nie stosuje się szkiełek mikroskopowych AdvanDx
QuickFISH (CS012) lub jeżeli brakuje ścisłej kontroli temperatury
podczas hybrydyzacji.
Oczekiwane wyniki
Butelki z badanymi Gram-ujemnymi-dodatnimi posiewami krwi
pochodziły od pacjentów z 5 ośrodków opieki zdrowotnej w Stanach
Zjednoczonych i liczyły 306 posiewów krwi od 306 pacjentów, a także
43 wzbogacone próbki. W przypadku pałeczek okrężnicy (E. coli),
pałeczek ropy błękitnej (P. aeruginosa) oraz pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae), pozytywne wyniki badań klinicznych wahały się
odpowiednio od 23% do 38%, od 0% do 12% i od 19% do 33%. Inne
Gram-ujemne organizmy były widoczne w 25%-48% próbek.
Prosimy zapoznać się z punktami „Środki ostrożności” i „Ograniczenia”
w niniejszej ulotce lub skontaktować się z firmą AdvanDx.
Nie jest konieczne zakładanie pokrywy na uchwyt na szkiełka
(SlideStation), aby zapewnić właściwe działanie zestawu.
Test może być wrażliwy na drobne zmiany związane z wielkością kropli
Gram-ujemnego niebieskiego roztworu PNA oraz Gram-ujemnego
żółtego roztworu PNA. W przypadku wypłynięcia piany z butelek,
NIE NALEŻY ICH UŻYWAĆ, ale należy zdjąć szkiełko nakrywkowe
i przygotować nowe przy użyciu nowych odczynników hybrydyzacji.
Przedstawione wartości stanowią odsetek unikalnych posiewów krwi
pacjenta (nie wliczono wielu próbek od tego samego pacjenta ani
wzbogaconych próbek) jako odsetek tego, co było widoczne przy
zastosowaniu rutynowych metod w stosunku do całkowitej liczby
wszystkich gatunków widocznych w badaniach.
Ograniczenia
Wartości dotyczące pozytywnych lub negatywnych wyników na obecność
gatunków uzyskanych za pomocą Gram-ujemnego QuickFISH BC mogą
zależeć od ośrodka badawczego i grupy pacjentów (2).
 Gram-ujemny QuickFISH BC nie jest kompatybilny z podłożami
do posiewu krwi zawierającymi węgiel ani z butelkami z posiewem
krwi VersaTREK REDOX 2.
Charakterystyka wyników
 Fałszywe zielone-pozytywne wyniki zostaną uzyskane z bakterią z
gatunku Shigella. (grupy serologiczne A, B, C i D), Escherichia albertii
oraz Escherichia fergusonii z powodu podobieństwa sekwencji rRNA.
Butelki z badanymi Gram-ujemnymi-dodatnimi posiewami krwi
pochodziły od pacjentów z 5 ośrodków opieki zdrowotnej w Stanach
Zjednoczonych i liczyły 306 posiewów krwi od 306 pacjentów, a także
43 wzbogacone próbki. Wrażliwości Gram-ujemnego QuickFISH BC
w porównaniu do rutynowych metod laboratoryjnych wynoszą 96,8%
(91/94) dla pałeczek okrężnicy (E. coli), 98,1% (52/53) dla pałeczek ropy
błękitnej (P. aeruginosa) oraz 100% (60/60) dla pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae), a specyficzność butelek z pozytywnymi posiewami krwi
zawierającymi Gram-ujemne pałeczki bacilli wynosi 99,0% (99/100).
 Fałszywe czerwone-pozytywne wyniki zostaną uzyskane
z Brevundimonas diminuta, Herbaspirillum huttiense, Pseudomonas
fulva, Acinetobacter radioresistens oraz kilkoma szczepami
Pseudomonas putida.
 Fałszywe żółte-pozytywne wyniki zostaną uzyskane z Escherichia
vulneris oraz Klebsiella variicola.
 Badania kliniczne przeprowadzono przy użyciu następujących butelek
z posiewami krwi: BACTEC aerobowa Plus, BACTEC lityczna/10
anaerobowa, BacT/ALERT SA i SN. Nie ustalono wyników
uzyskanych za pomocą Gram-ujemnego zestawu QuickFISH BC przy
użyciu innych rodzajów butelek z posiewami krwi.
4
Wyniki kliniczne dla Gram-ujemnego QuickFISH BC w porównaniu
z rutynową identyfikacją butelek z posiewem krwi zawierającym
Gram-ujemne-dodatnie pałeczki bacilli.
Pałeczki
okrężnicy
(E. coli)
Gramujemny
QuickFISH
N=307
Pałeczki
okrężnicy
(E. coli)
Pałeczki ropy
błękitnej
(P. aeruginosa)
Pałeczki
zapalenia płuc
(K. pneumoniae)
Negatywna
3
1
91
1,3
Ogółem
Ośrodek
1
Ośrodek
2
Ośrodek
3
Pozytywna
zgodność zielony
42/45
45/45
45/45
97,8%
(132/135)
Pozytywna
zgodność czerwony
42/45
45/45
45/45
97,8%
(132/135)
45/45
45/45
45/45
100%
(135/135)
Pałeczki
ropy
błękitnej (P.
aeruginosa)
Pałeczki
zapalenia
płuc (K.
pneumoniae)
Inne
0
0
0
0
1
Pozytywna
zgodność żółty
0
Negatywna
zgodność
42/45
45/45
45/45
97,8%
(132/135)
Ogólna
zgodność
95,0%
(171/180)
100%
(180/180)
100%
(180/180)
98,3%
(531/540)
2
0
52
1
0
60
2
Pozytywna
zgodność
96,8%
(91/94)
95% CI
(91,0-98,9)
1
Pozytywna
zgodność
98,1%
(52/53)
95% CI
(90,1-99,7)
0
Pozytywna
zgodność
100%
(60/60)
95% CI
(94,0-100)
3
99
Negatywna
zgodność
99,0%
(99/100)
95% CI
(94,6-99,8)
Podsumowanie wyników odtwarzalności w każdym dniu w
3 ośrodkach badań
Obejmuje 9 posiewów krwi wzbogaconych o kliniczne szczepy pałeczek okrężnicy (E. coli).
Obejmuje 34 posiewy krwi wzbogacone o kliniczne szczepy pałeczek ropy błękitnej
(P. aeruginosa).
3
Obejmuje 1 mieszany posiew pałeczek okrężnicy (E. coli) i pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae).
2
Butelki były przechowywane w temperaturze pokojowej po barwieniu
metodą Grama i przed badaniem metodą QuickFISH. 17% próbek
przetestowano w ciągu 2 godzin, 32% w ciągu 4 godzin, a 54% w ciągu
8 godzin. 45% próbek zostało przetestowanych w ciągu 8-48 godzin
w przypadku barwienia metodą Grama, a 1% zostało zbadanych
po upływie 48 godzin.
Granica wykrywalności
Analityczna czułość Gram-ujemnego QuickFISH BC mierzona jako
granica wykrywalności testu dla pałeczek okrężnicy (E. coli), pałeczek
ropy błękitnej (P. aeruginosa) oraz pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae) została określona odpowiednio na około 2,3x105,
4,0x105 oraz 4,5x105 CFU/ml poprzez seryjne rozcieńczenia. Jest to
zgodne z analityczną czułością innych metod barwienia opierających się
na wykorzystaniu szkiełek mikroskopowych
Dzień 1
Dzień 2
Dzień 3
Ogółem
Pozytywna
zgodność zielony
42/45
45/45
45/45
97,8%
(132/135)
Pozytywna
zgodność czerwony
45/45
42/45
45/45
97,8%
(132/135)
Pozytywna
zgodność żółty
45/45
45/45
45/45
100%
(135/135)
Negatywna
zgodność
45/45
42/45
45/45
97,8%
(132/135)
Ogólna
zgodność
98,3%
(177/180)
96,7%
(174/180)
100%
(180/180)
98,3%
(531/540)
Bibliografia
Specyficzność i czułość analityczna (niejednorodność)
1. Baron, E.J. 1998. Przetwarzanie danych z posiewów krwi i ich
interpretacja, rozdz. 2.3. In: H.D. Isenberg (Ed.) Podstawowe
procedury w mikrobiologii klinicznej, ASM Press, Washington DC.
Gram-ujemny QuickFISH BC został przetestowany
na 152 referencyjnych i klinicznych szczepach, obejmujących 16
szczepów pałeczek okrężnicy (E. coli), 21 szczepów pałeczek ropy
błękitnej (P. aeruginosa) oraz 12 szczepów pałeczek zapalenia płuc
(K. pneumoniae). Wszystkie 16 szczepów pałeczek okrężnicy (E. coli)
przyniosło zielone pozytywne wyniki, wszystkie 21 szczepów pałeczek
ropy błękitnej (P. aeruginosa) przyniosło czerwone pozytywne wyniki,
a wszystkie 12 szczepów pałeczek zapalenia płuc (K. pneumoniae)
przyniosło żółte pozytywne wyniki. Nie licząc tych trzech docelowych
gatunków, badanie objęło 86 szczepów innych Gram-ujemnych pałeczek
bacilli. Siedemdziesiąt osiem z nich przyniosło spodziewane negatywne
wyniki. Kolejnych 5 szczepów przyniosło fałszywe pozytywne zielone
wyniki: Escherichia albertii, Escherichia fergusonii oraz Shigella grupy
serologiczne A, B C i D. Kolejne 3 szczepy przyniosły fałszywe
pozytywne czerwone wyniki: Pseudomonas fulva (2 szczepy) oraz
Acinetobacter radioresistens. Badanie objęło również 17 szczepów
innych bakterii (11) oraz drożdży (6), z których każdy dał wynik
negatywny.
2. Karlowsky JA, Jones ME, Draghi DC, Thornsberry C, Sahm
DF, Volturo GA. 2004 r. Rozpowszechnienie i podatność
przeciwbakteryjna bakterii izolowanych z posiewów krwi pacjentów
hospitalizowanych w Stanach Zjednoczonych w 2002 r. Ann Clin
Micro and Antibiol. 3(7).
Definicje
Odtwarzalność
Poniżej zamieszczono wyniki trzydniowego badania odtwarzalności
przeprowadzonego z zestawem Gram-ujemnym QuickFISH BC
w 3 ośrodkach przez 2 osoby obsługujące w każdym z nich.
h
Kod produktu/numer katalogowy
i
Zapoznać się z instrukcją użycia
X
Zawiera materiał wystarczający do <n> testów
M
Wytwórca
P
Podsumowanie wyników odtwarzalności w każdym ośrodku
badawczym w ciągu 3 dni
5
Upoważniony przedstawiciel
H
Zużyć do
g
Kod serii
l
Ograniczenia temperatury przechowywania
Porady techniczne i obsługa klienta
W razie pytań, prosimy o kontakt z AdvanDx lub lokalnym dystrybutorem.
M
P
AdvanDx, Inc.
400 TradeCenter Suite 6990
Woburn, MA 01801
USA
AdvanDx A/S
Bygstubben 11
2950 Vedbæk
Dania
Tel:
+1 781 376 0009
Faks: +1 781 376 0111
Tel:
+45 45 16 07 99
Faks: +45 45 16 07 98
[email protected]
www.PNA-FISH.com
Wyprodukowano na licencji firmy Boston Probes, Inc.
Produkt ten nie może być stosowany w cytochemii człowieka,
wykorzystującej analizę na szkiełkach, w cytogenetyce nowotworów
opierającej się na hybrydyzacji w tkance ani w cytometrii przepływowej.
07 lutego 2014
PN2293. Rewizja A
Zakupienie tego zestawu jest równoznaczne z uzyskaniem licencji na jego stosowanie zgodnie
z następującymi patentami: US 5,985,563; US 5,888,733; US 6,664,045; US 6,395,474;
US 6,357,163; US 5,539,082; US 7,223,833; US 6,361,942; US 7,816,50; EP 862,650;
EP 804,456
6