Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin Clone MNF116

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin
Clone MNF116
Nr kat. M 0821
Wydanie 18.12.2002
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, Clone MNF 116, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje tkanki nabłonkowe, od jednowarstwowego nabłonka
gruczołowego po płaski nabłonek wielowarstwowy; stanowi ono użyteczne narzędzie w diagnostyce zdrowych
i nowotworowych komórek pochodzenia nabłonkowego (1, 2). Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez
wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog, na podstawie historii
choroby pacjenta oraz innych testów diagnostycznych.
Wstęp
Cytokeratyny (CK) należą do włókien pośrednich tworzących cytoszkielet praktycznie wszystkich komórek
eukariotycznych. W przeciwieństwie do innych włókien pośrednich, cytokeratyny zbudowane są z bardzo złożonej,
wielogenowej rodziny polipeptydów o masie cząsteczkowej od 40 do 68 kDa. Cytokeratyny ogólnie uważa się za
najważniejsze markery różnicowania nabłonka. Dotychczas w różnych nabłonkach występujących u człowieka
odkryto 20 różnych polipeptydów cytokeratynowych (3). CK można podzielić na 2 podrodziny: kwaśny typ A
(klasa I) oraz obojętno-zasadowy typ B (klasa II).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant kultury komórek
dializowany względem 0,05 mol/L Tris-HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: MNF 116. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG: patrz informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen
Nieoczyszczony ekstrakt komórek śledziony pobranych od myszy gołej z wszczepionymi komórkami MCF-7
(linia komórkowa ludzkiego raka sutka).
Swoistość
Przeciwciało jest skierowanym przeciwko keratynom odczynnikiem o szerokim spektrum działania, reagującym
z keratynami o średniej i niskiej masie cząsteczkowej. Dlatego też w badaniach metodą immunoblottingu
przeciwciało znakuje wiele dyskretnych pasm z przedziału od 40 do 58 kDa, odpowiadających cytokeratynom 5,
6, 8, 17 i prawdopodobnie 19.
Jak wykazano metodami immunochemicznymi, przeciwciało wchodzi w reakcje krzyżowe z białkowym
ekwiwalentem cytokeratyny u krów (4), myszy (5), królików (6) i szczurów.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu
w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie
z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie
i zatopionych w parafinie. Niezbędne jest wstępne przygotowanie tkanek przez nadtrawienie trypsyną (1, 7),
pepsyną (2) lub proteinazą K bądź odsłonięcie epitopu w podwyższonej temperaturze. W przypadku odsłaniania
epitopu w podwyższonej temperaturze optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval
Solution o wysokim pH, nr kat. S 3308 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Nieco gorsze wyniki
daje stosowanie Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0.
Ani podczas przygotowania tkanek, ani w trakcie następującej po nim procedury barwienia
immunocytochemicznego nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkankowych.
Skrawki zamrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało można stosować do znakowania zamrożonych
wycinków tkanek w sposób przedstawiony dla Dako EPOS-Conjugate, nr kat. U 7022 (8).
Procedura barwienia
(108006-002)
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, nr kat. M 0821, można rozcieńczać
w proporcjach 1:50–1:100 w przypadku jego stosowania na skrawkach ludzkiego migdałka utrwalonych
w formalinie i zatopionych w parafinie przy 20-minutowym cyklu odsłaniania epitopu w podwyższonej
temperaturze w 10 mmol/L buforze Tris i 1 mmol/L EDTA o pH 9,0 oraz 30-minutowej inkubacji w temperaturze
pokojowej z pierwszym przeciwciałem. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki oraz
metody przygotowania i powinny być określone przez poszczególne laboratoria. Zalecaną kontrolą ujemną jest
Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało.
Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury
barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w
M 0821/PL/HEW/18.12.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać jednocześnie z
testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamrożonych skrawków i preparatów komórkowych, jeśli pod uwagę brane jest barwienie endogenną
peroksydazą. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało nadaje się do barwienia immunocytochemicznego przy użyciu platform
automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia.
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje wiele różnych typów nabłonka, np. jednowarstwowy nabłonek
przewodów żółciowych i trzustkowych, proksymalnych i dystalnych kanalików nerkowych, nabłonek śluzówki
tarczycy, gruczołów przytarczycznych, żołądka, pęcherzyka żółciowego, jelita cienkiego i grubego, jak również
hepatocyty (1). Nabłonkowa wyściółka sieci jajnika, nadjajników, jajowodów i powierzchni jajników również
wykazuje reakcję na przeciwciało (7). W obrębie wielowarstwowym nabłonka płaskiego skóry przeciwciało
znakuje warstwę podstawną, jak również zewnętrzną pochewkę mieszka włosowego nabłonka
pęcherzykowatego oraz warstwę podstawną gruczołów i przewodów łojowych, zewnątrzwydzielniczych
i apokrynowych (2). Dodatni wynik reakcji z przeciwciałem MNF 116 daje także niepłaski nabłonek
wielowarstwowy przełyku i zewnętrznej powierzchni szyjki macicy (1). Przeciwciało znakuje również nabłonek
przejściowy (dróg moczowych) oraz inne złożone typy naskórka, np. przewodów i gronek sutka, gruczołów
wewnątrzszyjkowych, prostaty, najądrza, oskrzeli, a także przewodów i gronek ślinianek. Komórki tkanki
mezenchymatycznej z reguły nie wykazują reakcji na przeciwciało; obserwowano jednak słabe, ogniskowe
barwienie komórek mięśni gładkich. Przeciwciało nie znakuje śródbłonka, mięśni szkieletowych, chrząstek
i tkanek limfatycznych (1).
Tkanki patologiczne: Wśród nowotworów pochodzenia nabłonkowego przeciwciało znakowało: wszystkie
4 przypadki raka jelita grubego, wszystkie 3 przypadki raka żołądka, wszystkie 4 przypadki raka sutka,
wszystkie 3 przypadki raka prostaty, wszystkie 3 przypadki raka nerek, 3 z 4 przypadków raka
wątrobowokomórkowego, wszystkie 3 przypadki raka komórek przejściowych, 2 z 3 przypadków rakowiaka
wyrostka robaczkowego, a ponadto oba przypadki potworniaków, oba przypadki gruczolaka wielopostaciowego
(elementy nabłonkowe) i wszystkie 14 przypadków raka komórek płaskich nabłonka, w tym 6 pochodzenia
naskórkowego, 3 pochodzenia szyjkowego oraz 5 pochodzenia oskrzelowego (1). Ponadto dodatnią reakcję na
przeciwciało obserwowano we wszystkich 16 przypadkach różnego typu guzów i nowotworów z komórek
mięśniowo-nabłonkowych w tkankach miękkich (9). Przeciwciało znakuje także komórki międzybłoniaka, a także
komórki mikroprzerzutów niedrobnokomórkowego raka płuc w węzłach chłonnych (10). Nowotwory pochodzenia
nienabłonkowego, np. czerniaki, chłoniaki, łagodne i złośliwe guzy włókniste histiocytowe, mięśniaki gładkie,
tłuszczakomięsaki, mięsaki Ewinga, naczyniakowłókniaki, atypowe włókniakożółtaki, ziarniakożółtaki
młodzieńcze, naczyniaki krwionośne, guzy komórek ziarnistych, śluzaki mieszków włosowych, histiocytowe
guzy nabłonkowe oraz włókniakomięsaki skóry nie są znakowane przez przeciwciało. Jednakże w 1 z 6
przypadków (1) oraz 1 z 2 przypadków (2) mięsaka gładkokomórkowego przeciwciało wykazywało słabą
reaktywność ogniskową.
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Goddard MJ, Wilson B, Grant JW. Comparison of commercially available cytokeratin antibodies in normal
and neoplastic adult epithelial and non-epithelial tissues. J Clin Pathol 1991; 44:660–3.
Prieto VG, Lugo J, McNutt NS. Intermediate- and low-molecular-weight keratin detection with the
monoclonal antibody MNF 116. An immunohistochemical study on 232 paraffin-embedded cutaneous
lesions. J Cutan Pathol 1996; 23:234–41.
Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann,
Harris, editors. Subcellular Biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205–62.
Berkovitz BKB, Whatling R, Barrett AW, Omar SS. The structure of bovine periodontal ligament with
special reference to the epithelial cell rests. J Periodontol 1997; 68:905–13.
Lee I, Yu E, Ikehara S. Thymic epithelial cells of severe combined immunodeficiency (SCID) mice.
J Korean Med Sci 1994; 9:35–41.
Millar TJ, Herok G, Koutavas H, Martin DK, Anderton PJ. Immunohistochemical and histochemical
characterisation of epithelial cells of rabbit lacrimal glands in tissue sections and cell cultures. Tissue Cell
1996; 28:301–12.
Woolnough E, Russo L, Khan MS, Heatley MK. An immunohistochemical study of the rete ovarii and
epoophoron. Pathology 2000; 32:77–83.
Richter T, Nährig J, Komminoth P, Kowolik J, Werner M. Protocol for ultrarapid immunostaining of frozen
sections. J Clin Pathol 1999; 52:461–3.
Kilpatrick SE, Hitchcock MG, Kraus MD, Calonje E, Fletcher CDM. Mixed tumors and myoepitheliomas
of soft tissue. A clinicopathologic study of 19 cases with a unifying concept. Am J Surg Pathol 1997;
21:13–22.
Nicholson AG, Graham ANJ, Pezzella F, Agneta G, Goldstraw P, Pastorino U. Does the use
of immunohistochemistry to identify micrometastases provide useful information in the staging of nodenegative non-small cell lung carcinomas? Lung Cancer 1997; 18:231–40.
Objaśnienia symboli
(108006-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0821/PL/HEW/18.12.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17