BD™ Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin • BD Brain

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-254046.06
wer.: Dec 2013
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin 
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin
PRZEZNACZENIE
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin i BD Brain Heart Infusion Agar with 5%
Horse Blood and Bacitracin są selektywnymi podłożami do izolowania Haemophilus
influenzae z próbek pochodzenia klinicznego.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Wprawdzie rodzaj Haemophilus należy do fizjologicznej flory bakteryjnej górnych dróg
oddechowych u człowieka, jednak pewne serotypy H. influenzae, takie jak b i f (a o wiele
rzadziej również c), są ważną przyczyną zapalenia opon mózgowych, sepsy, zapalenia nagłośni
oraz wielu innych poważnych zakażeń. Do czasu wprowadzenia szczepień w wielu krajach, H.
influenzae był jedną z trzech najczęstszych przyczyn bakteryjnego zapalenia opon mózgowych
na świecie.1 Na zwykłym podłożu agarowym z krwią owczą nie obserwuje się wzrostu H.
influenzae i niektórych innych gatunków Haemophilus, gdyż wymagają one czynnika X (= hemu)
oraz V (=NAD).
Podłoże BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin zawiera hemoglobinę, która
dostarcza hemu, oraz BD IsoVitaleX, który dostarcza NAD (=dinukleotyd
nikotynoamidoadeninowy) oraz innych witamin. Podstawa GC II Chocolate Agar dostarcza
ogólnych składników odżywczych.
W podłożu BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, ogólnych
składników odżywczych dostarcza Brain Heart Infusion Agar, a krew końska jest źródłem hemu
(czynnik X) i NAD (czynnik V), które promują wzrost H. influenzae. Wzrost tego drobnoustroju
można dodatkowo wspomóc, umieszczając na podłożu po jego zaszczepieniu paski nasączone
czynnikiem V (np. paski nasączone czynnikiem V BD Taxo).
Do obu podłoży dodaje się bacytracynę, która hamuje większość flory fizjologicznej, podczas
gdy H. influenzae jest oporny na ten antybiotyk.1-4
Podłoża BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin i BD Brain Heart Infusion Agar
with 5% Horse Blood and Bacitracin są używane do izolowania Haemophilus influenzae z
próbek pochodzenia klinicznego zawierających florę fizjologiczną.
ODCZYNNIKI
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and
Bacitracin
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
7,5 g
Wybrany pepton mięsny
7,5
Skrobia kukurydziana
Wodorofosforan potasu
Dwuwodorofosforan potasu
Chlorek sodu
Agar
Bacytracyna
Hemoglobina
IsoVitaleX
pH 7,2 ± 0,2
PA-254046.06
1,0
4,0
1,0
5,0
14,0
50 000 IU
10,0
10,0 ml
-1-
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse
Blood and Bacitracin
Wyciąg z mózgów i serc
8,0 g
Hydrolizat pepsynowy tkanki
5,0
zwierzęcej
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
16,0
Chlorek sodu
5,0
Glukoza
2,0
Wodorofosforan sodu
2,5
Agar
13,5
Bacytracyna
16 500 IU
Krew końska pozbawiona włóknika
50,0 ml
pH 7,4 ± 0,2
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
Dodatek BD IsoVitalex Enrichment, dołączony do podłoża BD Chocolate Agar with
IsoVitaleX and Bacitracin, zawiera następujące czynniki wzrostu (skład* w przeliczeniu na
jeden litr wody oczyszczonej):
Witamina B12
L-glutamina
Adenina
Chlorowodorek guaniny
Kwas p-aminobenzoesowy
Dinukleotyd nikotynoamidoadeninowy (NAD)
Pirofosforan tiaminy
Azotan (V) żelaza (III)
Chlorowodorek tiaminy
Chlorowodorek cysteiny
L-cystyna
Glukoza
0,01 g
10,0
1,0
0,03
0,013
0,25
0,1
0,02
0,003
25,9
1,1
100,0
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki
inkubuje się przez 24–48 godzin w atmosferze tlenowej wzbogaconej dwutlenkiem węgla.
Szczepy bakteryjne
Haemophilus influenzae
ATCC 10211
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Streptococcus pneumoniae
ATCC 6305
Streptococcus pyogenes
ATCC 19615
Streptococcus mitis
DSM 12643
Bez posiewu
PA-254046.06
BD Chocolate Agar with
IsoVitaleX and Bacitracin
Wzrost akceptowalny do
dobrego; kolonie małe,
przejrzyste do szarych
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Czekoladowobrązowe,
przejrzyste
-2-
BD Brain Heart Infusion Agar with
5% Horse Blood and Bacitracin
Wzrost zadowalający, kolonie
przejrzyste, małe; dobry lub bardzo
dobry wzrost wokół umieszczonych na
podłożu pasków nasączonych
czynnikiem V
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Częściowe lub całkowite
zahamowanie wzrostu
Czerwone (kolor krwi)
PROCEDURA
Dostarczane materiały
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin lub
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin (oba dostarczane na
płytkach Stacker o śr. 90 mm). Sprawdzane pod kątem obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami; paski nasączone czynnikiem V BD Taxo (tylko do BD Brain Heart Infusion
Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin).
Typy próbek
Opisywane podłoża są przeznaczone do izolowania Haemophilus influenzae z materiałów
pochodzących z układu oddechowego, np. wymazów z gardła, lub innych próbek zawierających
florę fizjologiczną, np. wymazów ze spojówek (zobacz także CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW
I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY).
Pobieranie i transport próbek
Haemophilus influenzae jest wrażliwa na niekorzystne warunki środowiska. W związku z tym do
wszystkich próbek należy stosować odpowiednie podłoża transportowe. Próbki należy jak
najszybciej przesłać do laboratorium, najpóźniej w ciągu 24 godzin, nawet w przypadku
stosowania podłoża transportowego. Optymalna temperatura transportu wynosi 20–25°C. Nie
należy zamrażać próbek!
Procedura testowa
Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do laboratorium.
Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek
zawierających florę mieszaną.
Ewentualnie, jeżeli materiał jest hodowany bezpośrednio z wymazówki, można przetoczyć
wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew poprzez
rozprowadzenie materiału po podłożu. W celu poprawienia wzrostu, po wykonaniu posiewu na
podłożu BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin można umieścić
pasek nasączony czynnikiem V.
Płytki inkubuje się przez 24–48 godzin w środowisku wilgotnym. Wprawdzie wzrost H.
influenzae nie jest uzależniony od podwyższonego stężenia CO2, jednak inkubacja w pojemniku
BD GasPak wyposażonym w pakiet do produkcji gazu BD GasPak może ułatwić wzrost tego
drobnoustroju. W celu wyizolowania wszystkich drobnoustrojów występujących w próbce,
należy także wykonać posiew na podłoże BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) lub
BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base).
Wyniki
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Po zakończeniu 48-godzinnego okresu
inkubacji należy sprawdzić, czy na płytkach występują przejrzyste do szarych kolonie o średnicy
poniżej 2 mm. Na podłożu tym czasem obserwuje się także wzrost gatunków Haemophilus
innych niż H. influenzae.
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Po zakończeniu
48-godzinnego okresu inkubacji należy sprawdzić, czy na płytkach występują małe, przejrzyste
kolonie. Wzrost H. influenzae jest nasilony wokół pasków nasączonych czynnikiem V. Może
także występować wzrost innych gatunków Haemophilus bez suplementacji czynnika V. H.
influenzae nie ma właściwości hemolizujących, H. haemolyticus zazwyczaj ma zdolność
hemolizy beta.
Do ostatecznej identyfikacji szczepów wyizolowanych z tych podłoży konieczne jest wykonanie
dodatkowych testów biochemicznych lub serologicznych.
PA-254046.06
-3-
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
Podłoża te służą do izolowania Haemophilus influenzae z próbek pochodzenia klinicznego
pobranych z miejsc anatomicznych, w których występuje flora fizjologiczna. Podłoży tych nie
należy używać do pierwszej izolacji bakterii z rodzaju Haemophilus z płynu mózgowordzeniowego lub próbek pochodzących z innych pierwotnie sterylnych miejsc anatomicznych. Do
tego typu próbek należy stosować podłoża nieselektywne, takie jak BD Chocolate Agar (GC
Agar with IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base).
Choć podłoża BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin i BD Brain Heart Infusion
Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin mają charakter selektywny, to jednak czasem
obserwuje się na nich wzrost drobnoustrojów innych niż Haemophilus influenzae. Podłoża te
hamują wzrost większości gatunków bakterii należących do flory fizjologicznej jamy ustnej, lecz
nie powodują całkowitego zahamowania wzrostu występujących w jamie ustnej Neisseria sp.,
Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens oraz niektórych gronkowców.
W celu potwierdzenia izolacji H. influenzae lub innych gatunków Haemophilus konieczne jest
wykonanie barwienia metodą Grama oraz inne testów biochemicznych i serologicznych.
Niektóre szczepy i gatunki Haemophilus, w tym H. influenzae var. aegyptius (=H. aegyptius) i H.
ducreyi ulegają zahamowaniu przez bacytracynę, w związku z czym na tych podłożach nie
obserwuje się ich wzrostu.
W celu pełnego wyizolowania wszystkich drobnoustrojów występujących w próbce, należy
wykonać posiew także na podłoże nieselektywne, takie jak BD Chocolate Agar (GC Agar with
IsoVitaleX) lub BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base).
Ze względu na to, że gatunki z rodzaju Haemophilus należą do fizjologicznej flory bakteryjnej
dróg oddechowych, ich obecność w próbkach z górnych dróg oddechowych, takich jak wymazy
z gardła lub plwocina, niekoniecznie musi oznaczać, że drobnoustroje te są przyczyną
zakażenia. Do wykazania, że wyizolowane szczepy należą do podtypów serologicznych, które
często powodują zakażenia, konieczne jest wykonanie testów serologicznych.1,2
PIŚMIENNICTWO
1. Kilian, M. 2003. Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H.
Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
2. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme
Verlag, Stuttgart 1992.
3. Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi. 1974.
Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis
associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28:688-690.
4. Chapin, K., and G.V. Doern. 1983. Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from
species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17:1163-1165.
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin
Nr katalogowy 254046
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 20
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin
Nr katalogowy 256182
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 20
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
PA-254046.06
-4-
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD
PA-254046.06
-5-