Alpha-2-Macroglobulin - Serum Application Note

Białko C-reaktywne (Czułe)
Ogólny opis procedury
Opis procedury
Ogólne wytyczne do oznaczania
Białka C-reaktywnego w surowicy/osoczu
Informacje ogólne
Przeznaczenie
Opis procedury dotyczy ilościowego oznaczenia białka C-reaktywnego (C-Reactive protein, CRP) w próbkach materiału
pochodzenia ludzkiego z wykorzystaniem urządzeń, dla których nie istnieją szczegółowe wytyczne (1).
Należy sprawdzić wydajność urządzenia wybranego przez klienta.
Zakres pomiarowy
Około 0,2–15 mg/L, w zależności od konkretnej partii kalibratora. Zakres może zostać poszerzony w przypadku
późniejszego zagęszczenia lub rozcieńczenia próbki.
Zakres normy
0–0,5 mg/L (2).
Zaleca się wyznaczenie zakresu normy dla lokalnej populacji.
Ustawienia urządzenia
Wytyczne odnośnie programowania urządzenia zamieszczono w punkcie „Sugerowane ustawienia urządzenia...”
na stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciało
Bufor
Kalibrator
Kontrola
Rozcieńczalnik
Nr kat.
LX001
S2360
X0970
X0971
X0972
S2005
Nazwa
DakoCytomation C-Reactive Protein Immunoparticles (Sensitive)
DakoCytomation Reaction Buffer 8
DakoCytomation C-Reactive Protein Calibrator (Sensitive)
DakoCytomation C-Reactive Protein Low Control (Sensitive)
DakoCytomation C-Reactive Protein High Control (Sensitive)
DakoCytomation Dilution Buffer 1
Próbki
Ludzka surowica, osocze z dodatkiem heparyny lub osocze z EDTA.
Stabilne przez 5 dni w temperaturze 2–8 °C.
Nie zaleca się stosowania próbek poddanych wcześniejszemu zamrażaniu.
Kalibrator
Rozcieńczenie standardów wykonuje się automatycznie w urządzeniu zgodnie z instrukcją, lub ręcznie.
Bufor
Bufor jest gotowy do użytku. W analizatorze stabilne do 8 tygodni w temperaturze 2–12 °C.
Przeciwciało
Zawiesina czynników immunologicznych jest gotowa do użytku.
Stabilność w temperaturze 2–8°C: Patrz karta specyfikacji i data ważności na etykiecie.
Stabilność w urządzeniu: 8 tygodni w temperaturze 2–12 °C.
Wydajność: 1 mL zawiesiny czynników immunologicznych umożliwia dokonanie około 10 odczytów kuwet wzorców
lub próbek przy zastosowaniu 100 µL zawiesiny czynników immunologicznych na test. Przy obliczaniu wymaganej
objętości odczynnika należy wziąć pod uwagę nieużyteczną objętość buteleczki.
Stabilność kalibracji
Zaleca się powtarzanie kalibracji co 8 tygodni, po zmianie partii odczynnika lub w przypadku, gdy jakość wyników
spadnie poniżej poziomu przyjętego w danym laboratorium. Należy jednak zweryfikować stabilność kalibracji dla
danego urządzenia.
Rozwiązywanie
problemów
Jeśli wydajność jest nieakceptowalna, należy dokonać ponownej kalibracji. Zweryfikować odczynniki i procedurę.
Jeśli problemy będą się utrzymywać, proszę się skontaktować z dostawcą urządzenia lub obsługą techniczną firmy
DakoCytomation.
(113211-001)
30 134.LX001.01/PL/KGR/22.09.04 str. 1/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Białko C-reaktywne (Czułe)
Ogólny opis procedury
Przykładowe dane wydajnościowe na urządzeniu Hitachi 917
Czułość
Wartość gęstości optycznej (OD) około 0,35 w urządzeniu Hitachi 917 odpowiada stężeniu CRP wynoszącemu
ok. 14 mg/L.
Limit detekcji
Szacunkowy limit detekcji wynosi 0,09 mg/L.
Precyzja
Precyzję oszacowano przy użyciu dwóch odczynników kontrolnych i surowic o trzech znanych stężeniach CRP,
zgodnie z wytycznymi zamieszczonymi w dokumencie NCCLS EP5-A (3).
Próbki
C-Reactive Protein Low Control
(Sensitive), Nr kat. X0971
C-Reactive Protein High Control
(Sensitive), Nr kat. X0972
Pula A ludzkich surowic
Pula B ludzkich surowic
Pula C ludzkich surowic
Średnie
stęż.
CRP
(mg/L)
W serii
Odchylenie standardowe
(mg/L)
Miêdzy
Między
Razem
seriami
dniami
Całk. wsp.
zmienności
(%)
n
3,26
0,026
0,040
0,030
0,057
1,7
80
11,62
0,031
0,109
0,110
0,158
1,4
80
0,87
7,06
13,33
0,032
0,021
0,035
0,022
0,075
0,077
0,016
0,000
0,035
0,042
0,077
0,091
4,9
1,1
0,7
80
80
80
Dokładność
Oczekiwana dokładność wykrycia CRP wynosi 85–115% przy stosowaniu DakoCytomation C-Reactive Protein Low
Control (Sensitive), Nr kat. X0971, i DakoCytomation C-Reactive Protein High Control (Sensitive), Nr kat. X0972
Liniowość
Test jest liniowy w zakresie 0,2–60 mg/L.
Bezpieczny zakres
Nie stwierdzono nadmiernego stężenia antygenu dla stężenia CRP poniżej 500 mg/L.
Zakłócenia
Nie stwierdzono zakłóceń przy stężeniach do 10 g/L hemoglobiny, 25 g/L trójglicerydów, 1200 IU/mL czynnika
reumatoidalnego oraz 275 mg/L (~325 µmol/L) bilirubiny związanej i 320 mg/L (~ 550 µmol/L) bilirubiny wolnej.
Bilirubina w stężeniach wyższych od podanych znacząco redukuje sygnał (zaniża wyniki).
Porównanie metod
Oznaczanie CRP zgodnie z niniejszą procedurą porównano z dostępnym komercyjnie testem nefelometrycznym. Dane
dostępne są na życzenie.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
Med 2001;39:1098-109.
2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional
societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based
on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin
Biochem 1996;34:517-20.
3. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, Approved Guideline, NCCLS Document
EP5-A, 1998.
(113211-001)
30 134.LX001.01/PL/KGR/22.09.04 str. 2/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Białko C-reaktywne (Czułe)
Ogólny opis procedury
Sugerowane ustawienia urządzenia dla ludzkiego białka C-reaktywnego
Zalecenia specjalne
Zasadnicza długość fali powinna wynosić 450 nm.
Zaleca się następujący przebieg reakcji:
1. Mieszanie (rozcieńczonej) próbki z buforem.
2. Inkubacja (do uzyskania stabilnych odczytów).
3. Dodanie reagentu z czynnikami immunologicznymi.
4. Ślepa (pierwszy odczyt) natychmiast po wymieszaniu odczynników.
5. Pomiar sygnału w trakcie reakcji aż do osiągnięcia punktu końcowego.
* Parametr
Sugerowane
Droga optyczna (mm)
Czas inkubacji (s)
Rozcieńczenie próbki (Mnożnik rozc.)
Objętość wstępnie rozcieńczonej próbki (µL)
Objętość próbki (µL) (=Stężonej)
Rozcieńczalnik+płuczka (dla próbki+odczynnik) (µL)
Objętość buforu reakcyjnego (µL)
Stężenie PEG w buforze (%)
Stężenie PEG obj. poddanej inkubacji (%)
Objętość poddana inkubacji (µL)
Rozcieńczenie przeciwciała (Mnożnik rozc. przec.)
Objętość rozcieńczonego przeciwciała (µL)
Objętość przeciwciała (µL) (=Stężonego)
Rozcieńczalnik+płuczka (dla przeciwciała) (µL)
10
120
1
5
5
0
385
1
0,987
390
1
84
84
26
Całkowita objętość (µL)
500
Czas reakcji (s)
Całkowity czas analizy (s)
300
420
Stosunek
Obj. próbki.(stez.)
Obj. przeciwciala(stez.)
0,06
[0,05 – 0,06]
Relacja
Stez. PEG w obj inkub.(%)* Obj. próbki(stez.)
Obj.inkuba cji
0,013
[0,01 – 0,013]
Stosunek
Obj. próbki(stez.)
Obj. calk.
0,0100
[0,0085 – 0,0102]
Stężenie PEG w obj. całkowitej (%)
Standardy
0,77
Mnożnik rozc.
Std 1 (Najwyższe stęż.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (Najniższe stęż.)
2,13
6,29
16,61
54,95
90,91
161,29
[0,76 – 0,78]
Względne fi
mnożnik stęż.
0,4704
0,1591
0,0602
0,0182
0,0110
0,0062
*
Szczegółowe wyjaśnienia poszczególnych parametrów zamieszczono we wprowadzeniu do „Introduction to DakoCytomation General
Application Notes” (Wstęp do procedur ogólnych DakoCytomation), nr kat. 30134, dostępnym na życzenie lub na www.dakocytomation.com
[ ] Wskazuje na akceptowalny zakres na różnych urządzeniach.
fi Względny współczynnik stężenia stosowany do wyliczania względnych stężeń (RC(i)) CRP w standardach z konkretnych partii kalibratora
(C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal).
(113211-001)
30 134.LX001.01/PL/KGR/22.09.04 str. 3/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17