Steiner II Staining Kit

Odtwarzanie, mieszanie, rozcieńczanie, miareczkowanie
Steiner II Staining Kit
Nie jest wymagane odtwarzanie, mieszanie, rozcieńczanie ani miareczkowanie
odczynników z zestawu. Dodatkowe rozcieńczenie któregokolwiek z odczynników może
spowodować, że jakość barwienia będzie niezadowalająca. W razie zmian któregokolwiek
z parametrów konieczne jest przeprowadzenie walidacji przez użytkownika.
860-030
06521894001
Odczynniki w tym zestawie rozcieńczono optymalnie pod kątem użycia w automatach do
barwienia preparatów BenchMark Special Stains. Odczynniki te mogą okazać się
nieodpowiednie do barwienia ręcznego lub barwienia w innych urządzeniach.
40
PRZEZNACZENIE
Materiały i odczynniki wymagane, ale niedostarczane
Zestaw do barwienia Steiner II Staining Kit jest przeznaczony do stosowania
w diagnostyce in vitro (IVD, ang. In Vitro Diagnostic). Jest to jakościowa metoda barwienia
histologicznego wykorzystywana do analizy określonych mikroorganizmów
srebrochłonnych znajdujących się w tkankach utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie.
1.
2.
3.
4.
5.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego patologa w połączeniu
z badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami kontrolnymi.
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Steiner II Staining Kit jest zestawem wykorzystującym jony srebra w celu identyfikacji wielu
mikroorganizmów, takich jak bakterie szczepu Helicobacter pylori, krętki, czy bakterie szczepu
Legionella pneumophila. Te techniki zostały przedstawione przez Garveya.1
ZASADY PROCEDURY
Mikroorganizmy są uwidaczniane dzięki wykorzystaniu uczulacza, który umożliwia im
szybszy wychwyt srebra niż otaczającym tkankom (odczynnik Steiner II Oxidizer). Azotan
srebra przenika do wnętrza mikroorganizmów (odczynnik Steiner II Silver A). Filtr
rozpraszający zakłada się w celu zapewnienia dobrego rozprzestrzeniania się
wzmacniacza na preparacie. Skrawki są poddawane działaniu odczynników (reduktor
Steiner II Reducer, wzmacniacz Steiner II Enhancer oraz odczynnik do barwienia Steiner
II Silver B), które redukują jony srebra do czarnego metalicznego srebra, a elementy
tkanek niezawierające srebra barwią na kolory od złoto-żółtego do jasnobrązowego.
Ten zestaw zoptymalizowano pod kątem użycia w automatach do barwienia BenchMark
Special Stains firmy VENTANA. Odczynniki nanoszone są na tkankę umieszczoną na
szkiełku mikroskopowym i mieszane na całej powierzchni preparatu. Reakcja barwna
polega na redukcji jonów srebra do metalicznego srebra przez hydrochinon.2
MATERIAŁY I METODY
6.
7.
8.
9.
10.
Fiolki z odczynnikami są dostarczane w uchwytach opatrzonych etykietami z kodem
kreskowym, przeznaczonych do umieszczenia w tackach na odczynniki w automacie do
barwienia preparatów. Jeden zestaw zawiera odczynniki wystarczające do wykonania
40 testów:
Jedna fiolka (19 ml) odczynnika Steiner II Oxidizer zawiera 0,01% chlorku cynku oraz
10% formaliny.
BenchMark Special Stains Deparaffinization Solution (10X)

BenchMark Special Stains Liquid Coverslip

BenchMark Special Stains Wash Solution (10X)
Ksylen lub inny odczynnik do prześwietlania (klasy histologicznej)
Alkohol do odczynników lub etanol (klasy histologicznej)
Woda dejonizowana lub destylowana
Syntetyczny środek do zatapiania
Szkiełko nakrywkowe
Przechowywanie i sposób postępowania
Zestaw Steiner II Staining Kit należy przechowywać w temperaturze 2–8°C. Informacje
o prawidłowych warunkach przechowywania podano na etykiecie. Schłodzone składniki
zestawu należy przed użyciem doprowadzić do temperatury pokojowej.
Prawidłowo przechowywane odczynniki pozostają stabilne do daty ważności
wydrukowanej na etykiecie fiolki. Nie istnieją widoczne objawy wskazujące na utratę
stabilności odczynników, dlatego równocześnie z badaniem właściwych próbek należy
wykonywać barwienia kontrolne. Słabe wybarwienie materiału kontroli pozytywnej może
świadczyć o niestabilności odczynnika. W takim wypadku należy niezwłocznie
skontaktować się z lokalnym przedstawicielem pomocy technicznej.
Firma Ventana zaleca, aby pobieranie i przechowywanie próbek odbywało się zgodnie
z dokumentem CLSI o symbolu M29-T2.3 Zalecanym utrwalaczem do tkanek jest 10%
roztwór obojętnej zbuforowanej formaliny.4
1.
2.
Jedna fiolka (15 ml) odczynnika Steiner II Silver A zawiera azotan srebra o stężeniu
0,25%.
Jedna fiolka (15 ml) odczynnika Steiner II Diffuser zawiera 50% alkohol do
odczynników.
Jedna fiolka (15 ml) wzmacniacza Steiner II Enhancer zawiera 5% gumowej masy
uszczelniającej i etanolu absolutnego.
Jedna fiolka (27 ml) odczynnika Steiner II Clean A zawiera 95% alkoholu do odczynników.*
3.
4.
Jedna fiolka (19 ml) reduktora Steiner II Reducer zawiera 0,8% hydrochinonu.
5.
Jedna fiolka (19 ml) odczynnika Steiner II Silver B zawiera 0,20% azotanu srebra.
Jedna fiolka (27 ml) odczynnika Steiner II Clean B zawiera 95% alkoholu do odczynników.
7 wkładek do fiolek z rurkami do zasysania.
10 opakowań po 2 patyczki z bawełnianą końcówką.
*Fiolki z odczynnikami Steiner II Clean A oraz Steiner II Enhancer muszą stać koło siebie
na tacce na odczynniki.
FT0700-440d

Pobieranie próbek i przygotowywanie ich do analizy
Dostarczane odczynniki
2012-08-13
Tkanka kontrolna
Szkiełko mikroskopowe (nienaładowane)
Suszarka umożliwiająca utrzymanie temperatury 70C  5C
Automat do barwienia preparatów BenchMark Special Stains
Odczynniki w opakowaniach zbiorczych przeznaczone do użytku z automatem do
barwienia preparatów BenchMark Special Stains:
1/3
Pociąć materiał na skrawki, zwykle o grubości od 3 do 5 µm i umieścić je na
nienaładowanych szkiełkach.
Wysuszyć preparaty w automacie do barwienia preparatów BenchMark Special
Stains lub poza nim za pomocą innej metody.

W przypadku suszenia preparatów za pomocą automatu do barwienia
preparatów BenchMark Special Stains przejść do etapu 3.

Poza automatem do barwienia suszyć preparaty przez co najmniej 30 minut
w temperaturze około 70°C. Odczekać, aż ostygną.
Wydrukować odpowiednie etykiety z kodami kreskowymi.
Przed odparafinowaniem umieścić na matowym końcu każdego szkiełka
odpowiednią etykietę z kodem kreskowym (informacje nt. prawidłowego
umieszczania etykiet zawiera instrukcja obsługi automatu do barwienia preparatów).
Zalecany protokół barwienia za pomocą automatu do barwienia preparatów
BenchMark Special Stains znajduje się w części „Instrukcja stosowania”.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Aby uzyskać informacje na temat zalecanej metody utylizacji produktu, należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub wojewódzkimi.
1011880PL Rev A
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
stanowiące zagrożenie biologiczne i utylizować z zachowaniem właściwych środków
ostrożności. Podczas pracy z próbkami i przy ich usuwaniu należy stosować standardowe
środki ostrożności w postępowaniu z materiałami potencjalnie zakaźnymi.
Należy unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników. Skażenie takie może być
przyczyną błędnych wyników.
Odczynniki te mogą powodować podrażnienia. Należy unikać kontaktu z oczami
i błonami śluzowymi. Jeśli dojdzie do kontaktu odczynnika z tymi obszarami, należy
obficie opłukać je wodą. Nie należy połykać ani wdychać żadnego z odczynników.
Odczynnik Steiner II Oxidizer jest łatwopalny i szkodliwy dla zdrowia; skutki jego
wdychania, połknięcia lub kontaktu ze skórą mogą być nieodwracalne. Istnieją
ograniczone dowody działania rakotwórczego.
Odczynnik Steiner II Silver A jest szkodliwy dla organizmów żyjących w wodzie
i może być powodem długotrwałych efektów ubocznych w środowisku wodnym.
Odczynnik Steiner II Diffuser jest uważany za łatwopalny.
Odczynnik Steiner II Enhancer jest łatwopalny i szkodliwy dla zdrowia; skutki jego
wdychania, połknięcia lub kontaktu ze skórą mogą być nieodwracalne. Substancja
jest szkodliwa dla organizmów żyjących w wodzie i może być powodem
długotrwałych skutków ubocznych w środowisku wodnym.
Odczynnik Steiner II Clean A jest łatwopalny i szkodliwy dla zdrowia; skutki jego
wdychania, połknięcia lub kontaktu ze skórą mogą być nieodwracalne.
Odczynnik Steiner II Silver B jest szkodliwy dla organizmów żyjących w wodzie
i może być powodem długotrwałych efektów ubocznych w środowisku wodnym.
Odczynnik Steiner II Clean B jest łatwopalny i szkodliwy dla zdrowia; skutki jego
wdychania, połknięcia lub kontaktu ze skórą mogą być nieodwracalne.
Aby uzyskać uzupełniające informacje o bezpieczeństwie, należy zapoznać się
z kartą charakterystyki produktu oraz z podręcznikiem symboli i zwrotów R,
zamieszczonym na stronie www.ventana.com.
INSTRUKCJA STOSOWANIA
Przygotowanie fiolki z odczynnikiem
Tabela 1. Zalecany protokół barwienia za pomocą zestawu Steiner II Staining Kit (S
Steiner II) z użyciem automatu do barwienia preparatów BenchMark Special Stains.
Krok protokołu
Odparafinowanie
Suszenie
Optymalizacja intensywności
barwienia kontrastowego
(wywoływacz: Steiner II
Reducer, Steiner II Enhancer
i Steiner II Silver B)
Metoda
Wybranie opcji odparafinowania pozwala
automatyczne usunąć parafinę.
Aby włączyć suszenie, należy wybrać
temperaturę i czas inkubacji.
Należy wybrać temperaturę z zakresu od
50C do 65C oraz czas inkubacji z zakresu
od 8 do 16 minut:

8 minut, jaśniejsze zabarwienie
mikroorganizmów

16 minut, ciemniejsze zabarwienie
mikroorganizmów
W celu dostosowania preferencji barwienia
firma Ventana zaleca zwiększanie temperatury
i czasu inkubacji po jednym parametrze naraz.
Zalecana obróbka po wyjęciu z automatu
1.
2.
Usunąć płynne szkiełko nakrywkowe, płucząc preparaty w trzech zmianach alkoholu 95%.
Odwodnić, oczyścić i nakryć środkiem do trwałego zatapiania.
Instrukcja czyszczenia specjalnego
1.
2.
3.
4.
5.
Otworzyć pokrywę aspiratora.
Zanurzyć patyczek z bawełnianą końcówką w jednej fiolce oznaczonej jako Clean B.
Ostrożnie wysunąć ramię mechanizmu aspiratora.
Wytrzeć małą, metalową miseczkę poniżej końcówki aspiratora.
Zanurzyć drugi patyczek z bawełnianą końcówką w roztworze Clean B i dokładnie
oczyścić końcówkę aspiratora.
Zamknąć pokrywę aspiratora, gdy czyszczenie zostanie zakończone.
Przed pierwszym użyciem w fiolce z odczynnikiem należy umieścić wkładkę i rurkę do
zasysania.
6.
1.
PROCEDURY KONTROLI JAKOŚCI
2.
3.
Zdjąć korek transportowy z fiolki i włożyć do fiolki wkładkę i rurkę. Wkładkę i rurkę
do zasysania pozostawić w fiolce po jej otwarciu.
Gdy dany odczynnik jest używany, włożyć miękką nasadkę do otworu w uchwycie
na odczynniki.
Gdy odczynnik nie jest używany, użyć miękkiej nasadki do przykrycia fiolki.
Procedura barwienia
1.
2.
3.
Załadować odczynniki i preparaty do automatu.
Przeprowadzić cykl barwienia zgodnie z zalecanym protokołem barwienia (zobacz
tabela 1) i niniejszą instrukcją obsługi.
Po zakończeniu cyklu wyjąć preparaty z automatu.
Zalecany protokół barwienia
W charakterze materiału kontroli pozytywnej można użyć na przykład utrwalonej
w formalinie i zatopionej w parafinie tkanki ludzkiej zawierającej bakterie szczepu
H. pylori, krętki lub bakterie szczepu L. pneumophila.4 Tkanki kontrolne powinny być
próbkami świeżo pobranymi w ramach autopsji, biopsji lub chirurgicznie oraz
przygotowanymi lub utrwalonymi jak najszybciej w sposób identyczny jak skrawki badane.
Tkanki takie powinny być równolegle poddawane wszystkim etapom analizy, od
przygotowania do barwienia.
Zastosowanie skrawków tkankowych utrwalonych lub obrabianych w inny sposób niż
preparaty badane umożliwia kontrolę działania wszystkich odczynników i etapów
procedury z wyjątkiem utrwalania i obróbki tkanek. Składniki komórkowe innych
elementów tkanek mogą pełnić rolę kontroli negatywnej.
Tkanka kontrolna musi być testowana w każdym cyklu barwienia.
Parametry procedur zautomatyzowanych można wyświetlać, drukować i edytować
zgodnie z procedurą opisaną w instrukcji obsługi urządzenia.
Opisane poniżej procedury mogą być stosowane do tkanek o różnej grubości i różnym
rozmiarze oraz mogą być dostosowane do preferencji użytkownika. Wskazane jest próbne
wykonanie barwienia przy użyciu poszczególnych protokołów w celu dostosowania
barwienia do preferencji użytkownika.
Wybranie opcji wyszczególnionych w tabeli 1 protokołu umożliwia włączenie funkcji
odparafinowania i suszenia w automacie BenchMark Special Stains.
Znane dodatnie kontrole tkankowe powinny być stosowane wyłącznie w celu
monitorowania jakości badanych tkanek i odczynników testowych, a nie do diagnozowania
próbek pochodzących od pacjentów.
Jeżeli nie udaje się potwierdzić dodatniego wybarwienia w preparatach dodatnich kontroli
tkankowych, należy uznać, że wyniki uzyskane dla preparatów testowych są nieważne.
Jeżeli w kontrolach negatywnych uzyskuje się wynik pozytywny, należy uznać, że wyniki
preparatów testowych są nieważne.
Niewyjaśnione rozbieżności w wynikach kontroli należy niezwłocznie zgłaszać do
lokalnego przedstawiciela pomocy technicznej. Jeżeli wyniki kontroli jakości nie są zgodne
ze specyfikacją, wyniki uzyskane dla preparatów z próbek pochodzących od pacjentów są
nieważne. Należy zidentyfikować i wyeliminować przyczynę, a następnie ponownie
zbadać preparaty z próbek pochodzących od pacjentów.
2012-08-13
FT0700-440d
2/3
1011880PL Rev A
OGRANICZENIA
PIŚMIENNICTWO
Ograniczenia ogólne
1.
1.
2.
3.
Wykonywanie odczynów histologicznych jest wieloetapowym procesem
diagnostycznym wymagającym specjalistycznego przeszkolenia w doborze
odpowiednich odczynników, wyborze tkanek, utrwalaniu i obróbce, przygotowaniu
preparatów i interpretacji wyników barwienia.
Wybarwienie tkanek zależy od sposobu obróbki i przetworzenia tkanek przed
barwieniem. Różnice w sposobie obróbki preparatów tkankowych i procedurach
technicznych mogą być przyczyną znacznego zróżnicowania wyników, dlatego
wymagane jest regularne wykonywanie barwień kontrolnych (zobacz część
„Procedury kontroli jakości”). Nieprawidłowe utrwalanie, zamrażanie, rozmrażanie,
przemywanie, suszenie, ogrzewanie, wykonywanie skrawków lub ich
zanieczyszczenie domieszką innych tkanek lub płynów może powodować artefakty
lub wyniki fałszywie ujemne.
Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego wyniku musi być prowadzona
w kontekście historii klinicznej, morfologii i innych kryteriów histopatologicznych.
Odpowiedzialność za zapoznanie się ze specjalnym barwnikiem oraz metodami
przygotowania preparatu spoczywa na wykwalifikowanym patologu. Barwienie
należy wykonać w akredytowanej pracowni histopatologicznej, pod nadzorem
histopatologa odpowiedzialnego za przeglądanie i ocenę wybarwionych preparatów
oraz właściwe wykonanie dodatnich i negatywnych prób kontrolnych.
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Automat do barwienia preparatów BenchMark Special Stains
1.
2.
3.
4.
2.
3.
4.
Garvey W. Silver Impregnation Techniques to Identify Spirochetes and Other
Bacteria. J Histotechnol. 1996;19(3):203-209.
Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and Practice of Histotechnology. 2nd edition.
St. Louis, MO: C.V. Mosby Company; 1980.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). CLSI Web site:
http://www.clsi.org/. Dostęp z 3 listopada 2011 r.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche.
© 2012 Ventana Medical Systems, Inc.
DANE TELEADRESOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Powtarzalność między automatami: 100 preparatów tkanki zainfekowanej
bakteriami szczepu H. pylori oraz krętkami wybarwiono za pomocą 5 różnych
automatów do barwienia preparatów BenchMark Special Stains (4 preparaty na
automat/5 cykli dziennie) i zestawu Steiner II Staining Kit. Wybarwienie preparatów
oceniano wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały istotnej różnicy
w wybarwieniu poszczególnych preparatów.
Powtarzalność między cyklami barwienia: 100 preparatów tkanki zainfekowanej
bakteriami szczepu H. pylori oraz krętkami wybarwiono za pomocą 5 automatów
do barwienia preparatów BenchMark Special Stains (4 preparaty na automat/5 cykli
dziennie) i zestawu Steiner II Staining Kit przez 5 nienastępujących po sobie dni.
Wybarwienie preparatów oceniano wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie
wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu poszczególnych preparatów.
Powtarzalność między partiami produktu: Przetestowano 3 różne partie produktu,
wybarwiając 3 różne tkanki zainfekowane bakteriami szczepu H. pylori oraz
krętkami. Przetestowano 20 preparatów na każdą partię produktu z użyciem
1 automatu do barwienia preparatów BenchMark Special Stains i zestawu Steiner II
Staining Kit (20 preparatów na cykl/1 cykl na dzień) przez 3 dni. Wybarwienie
preparatów oceniano wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały
istotnej różnicy w wybarwieniu poszczególnych preparatów.
Przetestowano zgodność zestawu Steiner II Staining Kit z innymi wybranymi
odczynnikami do barwienia. Nie odnotowano żadnych szkodliwych interakcji
chemicznych.
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
ROZWIĄZYWANIE PROBLEMÓW
1.
2.
3.
Grubość skrawków może mieć wpływ na jakość i wybarwienie preparatu.
W przypadku nieprawidłowego wybarwienia preparatów należy skontaktować się
z lokalnym przedstawicielem pomocy technicznej.
W tkankach martwiczych lub autolizowanych może występować nieswoisty odczyn
barwny.
Jeśli kontrola pozytywna nie daje prawidłowego wybarwienia, należy sprawdzić, czy
preparat jest opatrzony właściwym kodem kreskowym i prawidłowo wprowadzony
do automatu. Jeśli kod kreskowy jest poprawny, ale brak jest wybarwienia lub
wybarwienie jest nieprawidłowe, należy skontaktować się z lokalnym
przedstawicielem pomocy technicznej.
2012-08-13
FT0700-440d
3/3
1011880PL Rev A