ćwiczenie 1

PODSTAWY BIOTECHNOLOGII
SKRINING I IZOLACJA CZYSTYCH KULTUR (2h)
a) Powietrze – metoda sedymentacyjna Kocha
•
•
Przygotowane płytki Petriego (z agarem odżywczym lub brzeczkowym) eksponować
przez 15 min., następnie zamknąć wieczkiem i przenieść do termostatu, ustawiając je
dnem do góry
Po inkubacji policzyć wyrosłe kolonie zakładając, że z każdej komórki wyrosła jedna
kolonia i obliczyć liczbę drobnoustrojów (x) w 10 dm3 powietrza według wzoru:
a•100
x=
b•c
gdzie:
a- średnia arytmetyczna z liczby kolonii wyrosłych na dwóch płytkach z tym samym
podłożem;
b- powierzchnia płytki w cm2;
c- współczynnik czasu ekspozycji płytki (dla 15 min. c = 3)
100- przeliczenie powierzchni płytki na 100 cm2
Powietrze uznaje się za bardzo czyste, jeśli liczba drobnoustrojów w 10 dm3 nie jest
większa od 10, natomiast gdy przekracza 100 – powietrze jest bardzo zanieczyszczone.
b) Powierzchnie – metoda tamponowa
•
•
•
•
•
Przed oznaczeniem sterylny tampon z waty włożyć do kolby zawierającej 25 cm3
jałowego płynu do rozcieńczeń,
Szablon (25 cm2) wyjałowić alkoholem i przyłożyć do badanej powierzchni,
Odcisnąć tampon z nadmiaru płynu na wewnętrznych ściankach naczynia z płynem i
wytrzeć dokładnie powierzchnię ograniczoną szablonem,
Tampon wrzucić z powrotem do kolbki z płynem, wstrząsać przez 2 min. i z otrzymanej
zawiesiny wykonać posiewy na płytkach metodą powierzchniową, przenieść do inkubacji,
Po okresie inkubacji obliczyć liczbę drobnoustrojów przypadającą na 1cm2 badanej
powierzchni.
c) Opakowania – metoda popłuczyn
•
Do naczynia wlać płyn do rozcieńczeń, w ilości 1/20 objętości naczynia,
•
•
•
Zamknąć parafilmem i wytrząsać dokładnie wzdłuż osi poprzecznej i wzdłuż osi
podłużnej,
Z popłuczyn wykonać rozcieńczenia dziesiętne, a z ostatniego rozcieńczenia posiew na
płytkę Petriego, przenieść posiewy do inkubacji,
Po zakończonej hodowli obliczyć liczbę drobnoustrojów zawartą w 1cm3 popłuczyn
Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania w zeszycie
ćwiczeniowym
Literatura:
1. Duszkiewicz – Reinhard W., Grzybowski R., Sobczak E.: Teoria i ćwiczenia z
mikrobiologii ogólnej i technicznej, Wyd. SGGW, W-wa 1993.
2. Bednarski W., Reps A.: Biotechnologia żywności, WNT, W-wa 2003.
3. Libudzisz Z., Kowal K.: Mikrobiologia techniczna (tom I i II) Wyd. PŁ, Łódź 2000.