PT Screen

ms_07103352190V2.0
PT Screen
Test przesiewowy do oznaczania czasu protrombinowego
07103352 190
10 x 10 mL
Polski
Zastosowanie
Test in vitro do oznaczania czasu protrombinowego w osoczu
cytrynianowym we wskazanych analizatorach cobas t.
Podsumowanie
Test do oznaczania czasu protrombinowego (PT) według Quicka1 jest
globalnym testem przesiewowym do oznaczania krzepliwości
umożliwiającym ocenę zarówno zewnątrzpochodnych, jak i wspólnych
szlaków krzepnięcia (zawierających czynniki krzepnięcia VII, X, V, II i
fibrynogen).
Test PT służy do monitorowania pacjentów poddanych doustnej terapii
antykoagulantami2, do badań przesiewowych w kierunku koagulopatii
wykonywanych przed zabiegami chirurgicznymi lub do wykrywania
nabytych lub wrodzonych niedoborów czynników krzepnięcia3,4. Jest on
również narzędziem diagnostycznym służącym do wykrywania rozsianego
krzepnięcia wewnątrznaczyniowego (DIC)3,4, określania funkcji
czynnościowych wątroby5 lub niedoborów witaminy K3,4, spowodowanych
albo ciężkim niedożywieniem lub zaburzeniami metabolizmu witaminy K,
ponieważ poziom czynnika II, VII i X jest uzależniony od witaminy K.
Zasada pomiaru
Test zawiera tromboplastynę i wapń, które po dodaniu do ludzkiego osocza
cytrynianowego inicjują aktywację zewnątrzpochodnej kaskady krzepnięcia.
Czas, jaki upłynie od dodania odczynnika do osocza, do momentu
utworzenia się skrzepu fibrynowego jest oznaczany i podawany w
sekundach, INR (Znormalizowany Współczynnik Międzynarodowy) lub %
czasu prawidłowego.
Odczynniki - roztwory robocze
▪ 10 fiolek do sporządzenia 10 x 10 mL
Odczynnik zawiera ludzką oczyszczoną liofilizowaną tromboplastynę
łożyskową z chlorkiem wapnia i konserwanty.
Zalecenia i środki ostrożności
Przeznaczone wyłącznie do celów diagnostyki in vitro.
Należy stosować standardowe procedury postępowania z odczynnikami.
Wszelkie odpady należy usuwać zgodnie z lokalnymi przepisami.
Karta charakterystyki produktu dostępna na życzenie.
Unikać spienienia odczynników i próbek (materiału od pacjentów,
kalibratorów i kontroli).
Tromboplastyna pozyskiwana jest z łożyska ludzkiego. Wszystkie produkty
pochodzenia ludzkiego powinny być uważane za potencjalnie zakaźne.
Chociaż proces wytwarzania zawiera etapy, podczas których wirusy są
usuwane i/lub deaktywowane, niemniej żadna metoda nie może z całą
pewnością wykluczyć potencjalnego zagrożenia zakażeniem. W związku z
tym z materiałem należy postępować z taką samą ostrożnością, jak z
próbkami pacjentów. W przypadku bezpośredniego kontaktu należy
stosować się do wytycznych opracowanych przez odpowiednie działy
służby zdrowia.6,7
Postępowanie z odczynnikami
Ostrożnie rozpuścić zawartość fiolki poprzez dodanie 10 mL wody
destylowanej lub dejonizowanej. Zakręcić nakrętkę, nie zapominając o
gumowym korku, wymieszać zawartość odwracając fiolkę 8‑10 razy i
inkubować do rozpuszczenia w łaźni wodnej przez 45 minut w temp. 37 °C.
Zapewnić homogenność zawartości fiolki delikatnie ją obracając. Unikać
tworzenia się piany.
Przechowywanie i trwałość
Przechowywać w temperaturze 2‑8 °C.
Nieotwierane odczynniki zachowują trwałość do podanej daty ważności.
Rozpuszczone odczynniki przechowywać w oryginalnej fiolce.
Stabilność rekonstytuowanych odczynników w oryginalnych fiolkach:
w temp. 2‑8 °C (zamknięta)
5 dni
na pokładzie analizatora
48 godz.a)
cobas t 411
Biorąc pod uwagę liczne zmiany warunków przechowywania (częściowo na
pokładzie, częściowo w temp. 2‑8 °C); jeśli odczynnik przechowywany jest
w temp. 2‑8 °C, każde laboratorium powinno ustalić warunki zależne od
własnych procedur. Taki czas przechowywania nie powinien przekraczać
liczb przytoczonych powyżej, ustalonych na podstawie przechowywania w
warunkach kontrolowanych.
Nie zamrażać.
Pobieranie i przygotowanie materiału
Sprawdzono i zaakceptowano możliwość stosowania jedynie materiałów
biologicznych wymienionych poniżej:
3.2 % cytrynianowe osocze ludzkie
Używać standardowych probówek plastikowych lub wykonanych ze szkła
silikonowanego. Należy ściśle przestrzegać zachowania stosunku krwi
(9 części) do 0.11 M roztworu cytrynianu sodu (1 część).8,9
Podane rodzaje próbek oznaczono przy użyciu wybranych probówek do
pobierania materiału dostępnych na rynku w czasie wykonywania
oznaczeń. Oznacza to, że nie przetestowano probówek od wszystkich
producentów. Systemy pobierania próbek pochodzące od różnych
producentów mogą zawierać różniące się materiały, co w pewnych
przypadkach może mieć wpływ na wynik oznaczeń. W przypadku
stosowania probówek pierwotnych (systemów pobierania krwi) należy ściśle
przestrzegać zaleceń ich producenta.
Odwirować 15 minut przy 2500 g lub tak, by ilość płytek wynosiła
< 10000 płytek/μL.
Trwałość: 24 godz. w temperaturze 18‑25 °C.8
Materiały dostarczone w zestawie
Patrz "Odczynniki - roztwory robocze"
Niezbędne materiały dodatkowe (niedostarczone w zestawie)
▪
07105100190, Con 1, 20 x 1 mL
▪
07105339190, Con 2, 20 x 1 mL
▪
07142056190, PT Cal Set, 5 x 1 x 1 mL
▪
07204736190, Day Clean, 12 x 11 mL
▪ Analizator do oznaczania krzepliwości cobas t. Dodatkowe wymagane
materiały, zob. Instrukcja Obsługi analizatora.
▪ Woda destylowana lub dejonizowana
▪ Ogólne wyposażenie laboratoryjne
Oznaczenie
W celu optymalnego działania testu należy zastosować się do zaleceń
zawartych w niniejszej ulotce. Należy postępować zgodnie z poniższą
instrukcją obsługi dla operatora, uwzględniając typ aparatu.
Wszelkie zmiany w aplikacji nie zatwierdzone przez firmę Roche nie
podlegają gwarancji i muszą być zdefiniowane przez użytkownika.
Umieścić odczynniki, kontrole i kalibratory (jak to wymagane) w ich
oryginalnych fiolkach w analizatorze na określonych dla nich pozycjach.
Wyliczenie i kalibracja
Do kalibracji należy używać zestawu kalibratorów podanego w części
"Niezbędne materiały dodatkowe".
Wyniki testu PT Screen można wyrazić w:
▪ Czas (w sekundach); PT pacjenta (s) porównywany jest z czasem dla
prawidłowego osocza.
▪ Procent (%) aktywności prawidłowej.
▪ Międzynarodowy Współczynnik Znormalizowany (INR)
a) Po 24 godz. delikatnie kikakrotnie obrócić pomiędzy dłoniami.
2015-11, V 2.0 Polski
1/4
ms_07103352190V2.0
PT Screen
Test przesiewowy do oznaczania czasu protrombinowego
1. Wyliczenie INR za pomocą ISI
Odczynniki z tromboplastyną mogą znacznie różnić się między sobą
pod względem ich czułości na spadek poziomu czynników krzepnięcia
zależnych od witaminy K. Bez wykonania właściwej korekty może
doprowadzić to do niedających się zaakceptować różnic w reżymie
dawkowania doustnych leków przeciw krzepliwości.2 Aby
skompensować różnice pomiędzy czułościami odczynników na
tromboplastynę,Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) wprowadziła
Międzynarodowy Indeks Czułości (ISI), dzięki któremu uzyskane wyniki
są niezależne od odczynnika użytego w trakcie fazy stałej leczenia
przeciwzakrzepowego.10 ISI swoisty dla określonej serii odczynnika
służy do konwersji wyrażonych w sekundach wyników PT pacjenta (PT
pacjenta) na Międzynarodowy Współczynnik Znormalizowany (INR) za
pomocą poniższego wzoru:
INR = (PT pacjenta/średni prawidłowy PT)ISI
Średni prawidłowy PT (MNPT) jest geometryczną średnią testu PT
wyrażoną w sekundach oznaczona u przynajmniej 20 zdrowych
dawców.11,12
Inaczej MNPT można oznaczyć za pomocą PT Cal Set (szczegóły, zob.
ulotka metodyczna PT Cal Set, REF 07142056190).
Wartość ISI dla określonego odczynnika tromboplastynowego określa
się porównaniem metody odczynnika tromboplastyny, który ma zostać
poddany standaryzacji oraz tromboplastyny stanowiącej
międzynarodowy materiał referencyjny. Do wyznaczenia wartości ISI
zgodnie z wcześniej ustalonym schematem służą surowice prawidłowe
oraz surowice pochodzące od pacjentów w stabilnym stadium leczenia
przeciwzakrzepowego.10
Czasy uzyskane dla dwóch rodzajów odczynników tromboplastynowych
nanoszone są na papier w formie wykresu. Nachylenie linii regresji
ortogonalnej pomnożone przez wartość ISI dla tromboplastyny
referencyjnej odpowiada wartości ISI tromboplastyny poddawanej
badaniom.10
Wartość ISI swoista dla danej serii odczynnika podana jest na
oddzielnej etykiecie znajdującej się na opakowaniu z zawierającym
zestaw PT Screen.
Oznacza się ją wobec 4. międzynarodowego standardu tromboplastyny
ludzkiej, rekombinowanej, czystej rTF/09.
Stosowanie INR zaleca się podczas oceny PT u pacjentów poddanych
terapii przeciwzakrzepowej.13,14
Opublikowano zalecane zakresy terapeutyczne INR.2,13,14,15
2. Oznaczanie INR za pomocą kalibracji
Alternatywnym oznaczaniem INR do oznaczania poprzez ISI i MNPT
może być oznaczanie INR za pomocą kalibracji INR.
Do kalibracji INR używa się poziomów kalibratora PT Cal Set od 1 do 5,
wyszczególnionego w części "Niezbędne materiały dodatkowe (nie
dostarczone w zestawie)" i przypisanych do nich wartości INR podanych
na dołączonej do niego ulotce.
Spójność pomiarowa: Metodę wystandaryzowano wobec 4.
międzynarodowego standardu tromboplastyny ludzkiej, rekombinowanej
i czystej rTF/09.
Częstotliwość kalibracji: Kalibrację należy przeprowadzać minimum raz
dla jednej serii odczynnika.
Odnowienie kalibracji zaleca się w następujących sytuacjach: jeśli
wymagana: np. wyniki kontroli jakości znajdujące się poza określonymi
granicami.
3. Kalibracja w %
Do kalibracji w % wartości prawidłowych używa się poziomów
kalibratora PT Cal Set od 1 do 5, wyszczególnionego w części
"Niezbędne materiały dodatkowe (nie dostarczone w zestawie)" i
przypisanych do nich wartości % podanych na dołączonej do niego
ulotce.
Spójność pomiarowa: Niniejsza metoda jest spójna wobec oznaczenia
porcji osocza przygotowanego według DIN 58939.
Częstotliwość kalibracji: Kalibrację należy przeprowadzać minimum raz
dla jednej serii odczynnika.
Odnowienie kalibracji zaleca się w następujących sytuacjach: jeśli
wymagana: np. wyniki kontroli jakości znajdujące się poza określonymi
granicami.
Kontrola jakości
Do sprawdzenia dokładności i odtwarzalności wyników konieczne jest
przeprowadzenie kontroli.
Do kontroli należy używać zestawów kontroli wyszczególnionych w części
"Niezbędne materiały dodatkowe".
Częstotliwość i zakres przeprowadzania kontroli muszą być dostosowane
do indywidualnych wymogów danego laboratorium. Uzyskane wartości
winny zawierać się w wyznaczonych granicach. Wskazane jest, by każde
laboratorium opracowało procedury naprawcze, które należy wdrożyć, gdy
wyniki uzyskane dla materiałów kontrolnych znajdą się poza podanym
zakresem.
Procedury kontroli jakości należy stosować zgodnie z właściwymi
zaleceniami organów państwowych oraz lokalnymi wytycznymi.
Ograniczenia - substancje interferujące
Kryterium: Odzysk w granicach ± 10 % wartości początkowej.
Żółtaczka: Brak istotnej interferencji do stężenia bilirubiny
nieskoniugowanej ≤ 50 mg/dL. Brak istotnej interferencji do stężenia
bilirubiny skoniugowanej ≤ 15 mg/dL.
Hemoliza: Brak istotnej interferencji do stężenia hemoglobiny ≤ 650 mg/dL.
Lipemia (Intralipid): Brak istotnej interferencji do stężenia ≤ 650 mg/dL.
Wpływ lipemii, hemoglobiny i bilirubiny oznaczano wg. metody Glicka.16
Leki: Brak interferencji z najczęściej używanymi lekami w stężeniu
terapeutycznym.17,18
Heparyna drobnocząsteczkowa (LMWH): Nie zaobserwowano znaczących
interferencji w porcjach prawidłowego osocza po dodaniu LMWH do
uzyskania stężenia 1.2 IU/mL.
Heparyna niefrakcjonowana (UHF; kryterium: odzysk w ± 20 % wartości
początkowej): Nie zaobserwowano znaczących interferencji w porcjach
prawidłowego osocza po dodaniu UFH do uzyskania stężenia UFH
wynoszącego 0.65 IU/mL. Skutek jest wyraźniejszy przy wyższych
wartościach INR, np. w wypadku próbek z INR wynoszącym 2
zaobserwowano 20 % odchylenie przy stężeniu ponad 0.20 IU/mL UFH.
Antygeny toczniowe mogą powodować wydłużenie czasu krzepnięcia i
niniejszym zmieniać wartości INR.
Obecność w próbce bezpośrednich inhibitorów trombiny, takich jak
argatroban, biwalirudyna czy dabigatran lub inhibitorów czynnika Xa rywaroksabanu, apiksabanu i fondaparynuksu ma wpływ na wyniki testu
(wydłużenie [w sekundach], wzrost [w INR], spadek [w %])19, co może być
klinicznie istotne.
Dla celów diagnostycznych wyniki powinny być interpretowane z
uwzględnieniem historii choroby, badań klinicznych oraz innych danych o
pacjencie.
Wartości oczekiwane
9.6-12.0 sekund lub
71.2-117.7 %
Wartości te odpowiadają 2.5. i 97.5. percentylowi wyników uzyskanych na
przebadanych 125 próbkach prawidłowego osocza ludzkiego.
Wartości > 100 % nie są istotne z punktu widzenia klinicznego.
Wyniki gdzie INR > 5 powinno się poddać walidacji poprzez ponowne
oznaczenie.
W oparciu o populację pacjentów każde laboratorium powinno określić
poziom wartości oczekiwanych lub wyznaczyć własne zakresy wartości
referencyjnych.
2/4
2015-11, V 2.0 Polski
ms_07103352190V2.0
PT Screen
Test przesiewowy do oznaczania czasu protrombinowego
Szczegółowe dane o teście
Dane uzyskane przy użyciu analizatorów podano poniżej. Wyniki uzyskane
w poszczególnych laboratoriach mogą się różnić.
Precyzja
Powtarzalność i precyzję pośrednią oznaczono w oparciu o surowice
ludzkie i próbki kontrolne zgodnie z wymogami CLSI (Clinical and
Laboratory Standards Institute) EP5 (2 próbki w serii, 2 serie na dzień,
przez 21 dni). Uzyskano następujące wyniki:
▪ Wyniki w sekundach
Powtarzalność
Próbka
Średnia
(s)
OS
(s)
Precyzja pośrednia
WZ
%
Średnia
(s)
OS
(s)
Passing/Bablok20
Regresja liniowa
y = 1.01x + 0.0153
y = 1.00x + 0.0431
τ = 0.869
r = 0.991
Wartości PT uzyskane za pomocą odczynnika PT Screen znalazły się
pomiędzy 0.970, a 4.75 INR.
▪ INR w oparciu o kalibrację INR
Porównanie wartości INR uzyskanych za pomocą odczynnika PT Screen w
analizatorze cobas t 411 (y) z automatycznym testem do oznaczania
krzepliwości (x) pozwoliło uzyskać następujące korelacje (INR):
Liczba oznaczonych próbek: 113
WZ
%
Passing/Bablok20
Regresja liniowa
y = 0.957x + 0.145
r = 0.991
Con 1
11.7
0.1
0.8
11.7
0.1
1.2
y = 0.979x + 0.104
Con 2
38.0
0.3
0.8
38.0
0.5
1.4
τ = 0.870
Wartości PT uzyskane za pomocą odczynnika PT Screen znalazły się
pomiędzy 1.01, a 4.75 INR.
Osocze 1
11.4
0.1
1.0
11.4
0.2
1.3
Osocze 2
19.8
0.2
0.8
19.8
0.2
1.2
Osocze 3
39.5
0.2
0.4
39.5
0.4
1.0
▪ Wyniki w %
Powtarzalność
Precyzja pośrednia
Próbka
Średnia
(%)
OS
(%)
WZ
%
Średnia
(%)
OS
(%)
WZ
%
Con 1
79.9
1.6
2.0
79.9
2.3
2.9
Con 2
16.6
0.1
0.6
16.6
0.2
0.9
Osocze 1
85.1
2.2
2.6
85.1
2.8
3.3
Osocze 2
34.4
0.4
1.1
34.4
0.6
1.6
Osocze 3
16.2
0.1
0.3
16.2
0.1
0.7
▪ Wyniki w INR w oparciu o ISI
Powtarzalność
Precyzja pośrednia
Próbka
Średnia
(INR)
OS
(INR)
WZ
%
Średnia
(INR)
OS
(INR)
WZ
%
Con 1
1.12
0.01
0.9
1.12
0.01
1.3
Con 2
3.96
0.04
0.9
3.96
0.06
1.5
Osocze 1
1.09
0.01
1.1
1.09
0.02
1.4
Osocze 2
1.97
0.02
0.8
1.97
0.02
1.2
Osocze 3
4.13
0.02
0.4
4.13
0.04
1.0
▪ Wyniki w INR w oparciu o kalibrację INR
Powtarzalność
Precyzja pośrednia
Próbka
Średnia
(INR)
OS
(INR)
WZ
%
Średnia
(INR)
OS
(INR)
WZ
%
Con 1
1.12
0.01
0.9
1.12
0.01
1.3
Con 2
3.84
0.03
0.8
3.84
0.05
1.4
Osocze 1
1.09
0.01
1.1
1.09
0.02
1.4
Osocze 2
1.95
0.02
0.8
1.95
0.02
1.3
Osocze 3
4.00
0.02
0.4
4.00
0.04
1.0
Porównanie metod
▪ INR w oparciu o ISI
Porównanie wartości INR uzyskanych za pomocą odczynnika PT Screen w
analizatorze cobas t 411 (y) z automatycznym testem do oznaczania
krzepliwości (x) pozwoliło uzyskać następujące korelacje (INR):
Liczba oznaczonych próbek: 113
2015-11, V 2.0 Polski
Literatura
1 Quick J, Stanley-Brown M, Bancroft FW. A study of the coagulation
defect in hemophilia and in jaundice. American Journal of the Medical
Sciences, Thorofare, N.J., 1935, 190: 501-511.
2 Hirsh J, Fuster V, Ansell J, et al. American Heart Association/American
College of Cardiology Foundation Guide to warfarin therapy. Circulation
2003; 107: 1692-1711.
3 Green D. Interpreting coagulation assays. Blood Coagulation and
Fibrinolysis. 2010; 21 Suppl 1: S3-6.
4 Kamal AH, Tefferi A, Pruthi RK. How to interpret and pursue an
abnormal prothrombin time, activated partial thromboplastin time and
bleeding time in adults. Mayo Clin Proc. 2007; 82(7):864-873.
5 Limdi JK, HydeGM. Evaluation of abnormal liverfunction tests. Postgrad
Med J. 2003; 79(932):307-312.
6 Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens.
(29 CFR Part 1910.1030). Fed. Register.
7 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of
18 September 2000 on the protection of workers from risks related to
exposure to biological agents at work.
8 CLSI Document H21-A5, vol. 28, No. 5. Collection, transport, and
processing of blood specimens for testing plasma-based coagulation
assays and molecular hemostasis assays; approved guideline - 5th
edition, 2008.
9 CLSI Document H3-A6. Procedures for the collection of diagnostic
blood specimens by venipuncture; approved standard - Sixth Edition,
vol. 27, No. 26, 2007.
10 WHO technical report series No. 889, 1999, Annex 3.
11 Poller L. The Prothrombin Time. WHO/LAB/98.3.
12 Fairweather RB, Ansell J, van den Besselaar AMHP, et al. College of
American Pathologists. Conference XXXI on Laboratory Monitoring of
Oral Anticoagulant Therapy. Laboratory Monitoring of Oral
Anticoagulant Therapy. Arch Pathol Lab Med 1998, 122: 768-81.
13 Hirsch J, Dalen JE, Deykin D, et al. Oral Anticoagulants. Mechanism of
action, clinical effectiveness and optimal therapeutic range. Chest
1995; 108: 231S-46S.
14 Baglin TP, Keeling DM, Watson HG. Guidelines on oral anticoagulation
(warfarin): third edition - 2005 update, British Society for Haematology
2005;132: 277-285.
15 www.BCGuidelines, Guidelines & Protocols, Warfarin Therapy
management; Effective Date: October 1, 2010.
16 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of
Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation.
Clin Chem 1986;32:470-475.
17 Breuer J. Report on the Symposium “Drug effects in Clinical Chemistry
Methods”. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34:385-386.
3/4
ms_07103352190V2.0
PT Screen
Test przesiewowy do oznaczania czasu protrombinowego
18 Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry:
recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug
interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-385.
19 Stroobants AK, van Dam W, Bakker B, et al. Interference study of direct
thrombin inhibitors and anti-Xa inhibitors on hemostasis assays on a
cobas t 411 system, ISTH congress 2015, poster abstract.
20 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure
for method transformation. Application of linear regression procedures
for method comparison studies in clinical chemistry, Part III.
J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790.
W celu uzyskania dalszych informacji należy zapoznać się z instrukcją
obsługi dla danego analizatora i ulotkami metodycznymi dołączonymi do
opakowań.
W niniejszej ulotce metodycznej jako separatora dziesiętnego,
oddzielającego liczbę całkowitą od części dziesiętnych ułamka dziesiętnego
stosuje się zawsze kropkę. Separatorów oddzielających tysiące nie używa
się.
Symbole
Oprócz znaków zawartych w standardzie ISO 15223‑1, firma Roche
Diagnostics używa następujących symboli i znaków.
Zawartość zestawu
Analizatory/aparaty, w których można zastosować
odczynniki
Odczynnik
Kalibrator
Objętość po rekonstytucji lub wymieszaniu
Globalny handlowy numer identyfikacyjny
GTIN
Dodatki, usunięte fragmenty oraz zmiany zostały oznaczone na marginesie.
© 2015, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim
www.roche.com
4/4
2015-11, V 2.0 Polski