Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor α Klon

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Estrogen Receptor α
Klon 1D5
nr kat. M7047
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro
Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor α (mysie przeciwciało monoklonalne przeciw ludzkiemu receptorowi α dla
estrogenu), Klon 1D5, jest przeznaczone do badań immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje komórki α-pozytywne receptora
dla estrogenu i jest uŜytecznym narzędziem w ocenie stanu receptora α dla estrogenu w raku sutka (1–3). Interpretacja kliniczna
wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób
kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Streszczenie
Receptory hormonów steroidowych wykazują wysokie powinowactwo i swoistość do swoich ligandów. Ludzki i informacje ogólne
receptor dla estrogenu (ER) istnieje w dwóch formach, jako ERα i ERβ. Receptory wykazują wysoki stopień podobieństwa w zakresie
swoich wiązań DNA oraz domen wiązań ligandowów i mogą tworzyć heterodimery. Jednak obydwie formy ER sygnalizują to w róŜny
sposób, np. ERβ nie wzmacnia czynnika transkrypcji jądrowej AP-1 podczas tworzenia kompleksu z oestradiolem, natomiast ERα
wzmacnia go. Sugeruje to, Ŝe ERα i ERβ mogą pełnić róŜne role w regulacji genów, a ich względne poziomy w tkankach mogą mieć
wpływ na odpowiedzi komórek na estrogeny (3, 4).
W terapii raka sutka, pomiar stanu ERα jest powszechnie uwaŜany za uŜyteczny, poniewaŜ obecność ERα wiąŜe się z ogólną
poprawą przeŜycia i z korzystną reakcją na leczenie hormonalne (2, 3, 5-8).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji
do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie,
4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku
odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant kultury komórek dializowany wobec 0,05 mol/L
Tris/HCL (pH 7,2) i zawierający 15 mmol/L NaN 3.
Klon: 1D5 (9). Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysie IgG: Zobacz informację podaną na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu zapewnienia jednolitości
odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i
dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Rozpuszczalny rekombinant ludzkiego receptora dla estrogenu (9).
Swoistość
Przeciwciało swoiście reaguje z ERα i nie wykazuje Ŝadnej reakcji z ERβ (10, 11). Epitop znajduje się w domenie terminala N (region
A/B) ERα. Podczas stosowania techniki „Western immunoblotting”, przy uŜyciu ekstraktów białka z komórek COS transfekowanych z
wektorem plazmidu z ekspresją ER, linii komórek ludzkiego raka sutka MCF-7 oraz ludzkiej tkanki śluzówki macicy, przeciwciało
znakuje polipeptyd około 67 kDa odpowiadający ER. Nie zauwaŜono Ŝadnego znakowania komórek COS transfektowanych z
plazmidem zawierających usunięty mutant z brakującymi sekwencjami kodowania dla regionu A/B ER (9).
Jak wykazano w badaniu immunocytochemicznym, przeciwciało reaguje z białkowym równowaŜnikiem ERα u szczurów (10).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN 3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w
produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z
ołowiu i miedzi, tworząc nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec
nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować prawidłowe procedury
postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie uŜywać po dacie waŜności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w
innych warunkach niŜ warunki podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować te warunki. Brak oczywistych oznak wskazujących na brak
stabilności produktu. Dlatego teŜ naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne jednocześnie z badaniem próbek pacjentki. Jeśli
zauwaŜone zostanie nieoczekiwane zabarwienie, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych i podejrzewa się,
Ŝe przyczyną moŜe być przeciwciało, naleŜy niezwłocznie skontaktować się z działem pomocy technicznej naszej firmy.
Procedura barwienia
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜna stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie, zatopionych w
parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyŜszonej temperatury podczas odzyskiwania epitopu
(HIER). Zalecana jest obróbka wstępna z EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, pH 9 (nr kat. K8004), zgodnie z metodą 3-w-1
łączącą w sobie procedurę odparafinowania/HIER w aparacie Dako PT Link (nr. kat. PT100/PT101); roztwór ten stosuje się przez 20
minut w temperaturze 97°C, a nast ępnie przez 5 minut stosuje się bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer (nr kat. K8007). Informacje na
temat stosowania moŜna znaleźć w Instrukcji uŜytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu, skrawki
tkankowe naleŜy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor α, nr kat. M7047, moŜna stosować w rozcieńczeniu w stosunku
1:60 w przypadku stosowania na poddanych wstępnej obróbce, utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie skrawkach
ludzkiego raka sutka przy 20-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciała odczynnikiem
EnVision™ FLEX Antibody Diluent (nr kat. K8006). Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczona do
takiego samego stęŜenia jak mysie IgG jako pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej
nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed
uŜyciem. Kontrolę dodatnią i ujemną naleŜy wykonać jednocześnie z testem próbek pacjentki.
(106766-006)
M7047/PL/SSM/2012.03.21 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Wizualizacja: Do uzyskania maksymalnej wydajności wymagany jest odczynnik Dako EnVision™ FLEX+ Mouse, High
pH(nr kat. K8002/K8012) stosowany przez 15 minut dla przeciwciał EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) i przez 20 minut dla
przeciwciał EnVision™ FLEX/HRP. NaleŜy postępować zgodnie z procedurą załączoną do zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunohistochemicznego przy wykorzystaniu platform automatycznych
takich, jak Dako Autostainer, Autostainer Plus i Autostainer Link.
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują wzór barwienia w jądrach. Jeśli zauwaŜone zostanie znakowanie cytoplazmatyczne,
naleŜy je pominąć jako nieswoiste.
W literaturze naukowej donoszono o róŜnych skalach barwienia ER-dodatniego w odniesieniu do tkanek ludzkiego raka sutka. Np.
podawano wyniki barwienia jako odsetek komórek dodatnich lub skalę intensywności wybarwienia lub łącznie skalę intensywności
wybarwienia z odsetkiem komórek dodatnich (skala H) (2, 5, 6). Szczegółowy opis róŜnych systemów oceny moŜna znaleźć w (6).
Prawidłowe interpretacje uzyskiwano przy wartościach odcięcia od >0% do 45% (12-20).
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
1. Bufory przemycia zawierające wysokie poziomy detergentu mogą obniŜyć intensywność barwienia.
2. Okazjonalnie znakowane są guzy limfoidalne i nielimfoidalne nowotwory takie, jak czerniaki.
3. Parametry przedanalityczne, w tym sposób utrwalenia tkanek i obróbka mogą wpływać na warunki procedury barwienia.
Charakterystyka działania
Tkanki zdrowe: Przeciwciało testowano na duŜej liczbie zdrowych tkanek. ZauwaŜono dodatni odczyn jądrowy w przypadku gruczołu
sutkowego, szyjki macicy (nabłonki łuskowate), macicy (endometrium) oraz komórek mezenchymalnych i wyściełających pęcherzyki
płucne. Odczyn cytoplazmatyczny obserwuje się takŜe w gruczole krokowym (komórki zrębu włóknisto-mięśniowego), w
granulocytach i makrfogach. Sporadycznie obserwuje się odczyn nieswoisty tkanki martwiczej i wydzielin w płucach (21).
Tkanki patologiczne: Wiele badań przeprowadzonych na skrawkach raka sutka utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie
wykazało, Ŝe Anty-ERα, Klon 1D5, jest wiarygodny i skuteczny dla wykazania statusu ERα (1, 2, 5, 6, 8). Ponadto przeciwciało
dostarcza dokładnych prognostycznych informacji odnoszących się do reakcji na terapie hormonalne (2, 5, 6). Podczas porównania
znakowania przeciwciałem z reakcją na leczenie tamoksyfenem odnotowano dane dotyczące czułości wynoszące 90% (2) i 89% (5)
oraz dane dotyczące swoistości 51% (2) i 73% (5) W (2) zastosowano metodę oceny H (H-score) z dowolną wartością graniczną dla
wyników dodatnich wynoszącą 50, podczas gdy w (5) zastosowano punkt wartości granicznej 10% dla komórek dodatnich.
Piśmiennictwo
1.
Mauri FA, Veronese S, Frigo B, Girlando S, Losi L, Gambacorta M, et al. ER1D5 and H222 (ER-ICA) antibodies to human
estrogen receptor protein in breast carcinomas. Appl Immunohistochem 1994;2:157-63.
2. Goulding H, Pinder S, Cannon P, Pearson D, Nicholson R, Snead D, et al. A new immunohistochemical antibody for the
assessment of estrogen receptor status on routine formalin-fixed tissue samples. Hum Pathol 1995;26:291-4.
3. Shaw JA, Udokang K, Mosquera J-M, Chauhan H, Jones JL, Walker RA. Oestrogen receptors alpha and beta differ in normal
human breast and breast carcinomas. J Pathol 2002;198:450-7.
4. Marayama S, Fujimoto N, Asano K, Ito A. Suppression by estrogen receptor beta of AP-1 mediated transactivation through
estrogen receptor alpha. J Steroid Biochem Mol Biol 2001;78:177-84.
5. Pertschuk LP, Feldman JG, Kim Y-D, Braithwaite L, Schneider F, Braverman AS, et al. Estrogen receptor immunocytochemistry
in paraffin embedded tissues with ER1D5 predicts breast cancer endocrine response more accurately than H222Spγ in frozen
sections or cytosol-based ligand-binding assays. Cancer 1996;77:2514-9.
6. Barnes DM, Harris WH, Smith P, Millis RR, Rubens RD. Immunohistochemical determination of oestrogen receptor: comparison
of different methods of assessment of staining and correlation with clinical outcome of breast cancer patients. Br J Cancer
1996;74:1445-51.
7. Diaz LK, Sneige N. Estrogen receptor analysis for breast cancer. Current issues and keys to increasing testing accuracy. Adv
Anat Pathol 2005;12:10–9.
8. Cheang MC, Treaba DO, Speers CH, Olivotto IA, Bajdik CD, Chia SK, et al. Immunohistochemical detection using the new rabbit
monoclonal antibody SP1 of estrogen receptor in breast cancer is superior to mouse monoclonal antibody 1D5 in predicting
survival. J Clin Oncol 2006;24:5637-44.
9. Al Saati T, Clamens S, Cohen-Knafo E, Faye JC, Prats H, Coindre JM, et al. Production of monoclonal antibodies to human
estrogen-receptor protein (ER) using recombinant ER (RER). Int J Cancer 1993;55: 651-4.
10. Nishihara E, Nagayama Y, Inoue S, Hiroi H, Muramatsu M, Yamashita S, et al. Ontogenetic changes in the expression of
estrogen receptor α and β in rat pituitary gland detected by immunohistochemistry. Endocrinology 2000;141:615-20.
11. Pettersson K, Grandien K, Kuiper GGJM, Gustafsson J-Å. Mouse estrogen receptor β forms estrogen response element-binding
heterodimers with estrogen receptor α. Mol Endocrinol 1997;11:1486-96.
12. Chebil G, Bendahl PO, Fernö M; South Sweden Breast Cancer Group; North Sweden Breast Cancer Group. Estrogen and
progesterone receptor assay in paraffin-embedded breast cancer--reproducibility of assessment. Acta Oncol 2003;42:43-7.
13. Fernö M, Andersson C, Fallenius G, Idvall I. Oestrogen receptor analysis of paraffin sections and cytosol samples of primary breast
cancer in relation to outcome after adjuvant tamoxifen treatment. The South Sweden Breast Cancer Group. Acta Oncol 1996;35:1722.
14. Andersen J. Determination of estrogen receptors in paraffin-embedded tissue. Techniques and the value in breast cancer treatment.
Acta Oncol 1992;31:611-27.
15. Ferrero-Poüs M, Trassard M, Le Doussal V, Hacène K, Tubiana-Hulin M, Spyratos F. Comparison of enzyme immunoassay and
immunohistochemical measurements of estrogen and progesterone receptors in breast cancer patients. Appl Immunohistochem Mol
Morphol 2001;9:267-75.
16. Santeusanio G, Mauriello A, Ventura L, Liberati F, Colantoni A, Lasorella R, et al. Immunohistochemical analysis of estrogen
receptors in breast carcinomas using monoclonal antibodies that recognize different domains of the receptor molecule. Appl
Immunohistochem Mol Morphol 2000;8:275-84.
17. Grabau DA, Thorpe SM, Knoop A, Vach W, Schrøder HD, Blichert-Toft M, et al. Immunohistochemical assessment of oestrogen and
progesterone receptors: correlations with the DCC method and clinical outcome in primary breast cancer patients. Breast
2000;9:208-17.
18. Molino A, Micciolo R, Turazza M, Bonetti F, Piubello Q, Corgnati A, et al. Estrogen receptors in 699 primary breast cancers: a
comparison of immunohistochemical and biochemical methods. Breast Cancer Res Treat 1995;34:221-8.
19. Layfield LJ, Gupta D, Mooney EE. Assessment of Tissue Estrogen and Progesterone Receptor Levels: A survey of current practice,
techniques, and quantitation methods. Breast J 2000;6:189-96.
20. Leers MP, Hoop JG, van Beers M, van Rodijnen N, Pannebakker M, Nap M. Determination of threshold values for determining the
size of the fraction of steroid hormone receptor-positive tumor cells in paraffin-embedded breast carcinomas. Cytometry B Clin Cytom
2005;64:43-52.
21. Dako Technical Report TR10-52.
(106766-006)
M7047/PL/SSM/2012.03.21 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
(106766-006)
Nu me r katalo gowy
Tempera tura
prze chow yw ani a
Wyrób medyczn y d o
diagn ostyki i n vitro
Nu me r serii
Spra wdzi ć w instrukcji
stosowa ni a
ZuŜyć przed
Prod ucen t
M7047/PL/SSM/2012.03.21 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17