HDL Direct CP ABX Pentra

ABX Pentra
HDL Direct CP
ABX Pentra HDL Direct CP
Nr ref.: A11A01636
Objętość R1: 62 ml
Objętość R2: 21 ml
Zastosowanie
Odczynnik diagnostyczny do oznaczania ilościowego
in vitro stężenia cholesterolu w postaci lipoprotein o
dużej gęstości HDL-C w surowicy lub osoczu krwi
ludzkiej przy użyciu testu kolorymetrycznego.
2009/10/02
A93A00152L PL
A11A01636
62 ml
21 ml
Aspekty kliniczne
Lipoproteiny osocza są cząstkami kulistymi i zawierają zróżnicowaną
ilość cholesterolu, triglicerydów, fosfolipidów i białek.
Warstwa
powierzchniowa cząstki lipoproteiny składa się z fosfolipidów, wolnego
cholesterolu oraz białka, jej rdzeń składa się głównie z estrów
cholesterolu i triglicerydów. Cząstki te solubilizują i transportują
cholesterol i triglicerydy w krwioobiegu.
Względne udziały białek i tłuszczów określają gęstość lipoprotein i
pozwalają na ich klasyfikację (1). Lipoproteiny dzielą się na:
chylomikrony, lipoproteiny o bardzo małej gęstości (VLDL), lipoproteiny o
małej gęstości (LDL) oraz lipoproteiny o dużej gęstości (HDL). W
badaniach klinicznych wykazano wielokrotnie, że lipoproteiny zależnie od
klasy mają znaczny i zróżnicowany wpływ na ryzyko wystąpienia choroby
wieńcowej serca (2).
Podstawową rolą HDL w metabolizmie tłuszczów jest przyłączanie i
transport cholesterolu z tkanek obwodowych do wątroby, w wyniku
procesu znanego jako zwrotny transport cholesterolu (sugerowany
mechanizm ochronny serca) (3). Niskie stężenie HDL-C wiąże się ściśle
z podwyższonym ryzykiem zachorowania na chorobę wieńcową serca
oraz miażdżycę tętnic wieńcowych (4-9). Dlatego też oznaczenie stężenia
HDL-C w surowicy krwi stosuje się jako narzędzie do diagnozowania
pacjentów wysokiego ryzyka.
Rada ds. Leczenia Dorosłych
amerykańskiego Narodowego Programu Edukacyjnego dotyczącego
Cholesterolu (NCEP) zaleca wszystkim osobom od 20 roku życia
wykonywanie na czczo lipidogramu pozwalającego na oznaczenie
poszczególnych frakcji cholesterolu: cholesterolu całkowitego,
cholesterolu LDL, cholesterolu HDL i triglicerydów, co pięć lat w
profilaktyce ryzyka choroby wieńcowej serca (10).
Metoda wzorcowa oznaczania ilościowego stężenia HDL-C polega na
ultrawirowaniu i strącaniu chemicznym, w celu oddzielenia HDL od
innych lipoprotein. Następnie oznacza się poziom cholesterolu metodą
Abell-Kendall (11). Metoda ta jest jednak zbyt czasochłonna i wymaga
zbyt dużego nakładu pracy, aby stosować ją w badaniach rutynowych
(12). Pierwsze metody stosowane rutynowo na szeroką skalę w
laboratoriach polegały na selektywnym strącaniu i usunięciu LDL i VLDL,
a następnie oznaczeniu stężenia HDL-C w supernatancie metodą
enzymatyczną (11). Ponieważ takie metody wymagają uprzedniego
przygotowania próbki i oddzielania, analiz nie można w pełni
zautomatyzować. Z tego też powodu, rutynowe oznaczenia HDL-C
cechowały się zawsze niską powtarzalnością i były czasochłonne.
Metoda stosowana w oznaczeniach
* Produkt licencjonowany PCT/JP97/04442, PCT/
JP00/03860.
Metoda ta korzysta z dwóch odczynników i opiera się na właściwościach
wyjątkowego detergentu, tak jak to pokazano poniżej. Metoda ta polega
na przyspieszeniu reakcji oksydazy cholesterolowej (CO) z
nieestryfikowanym cholesterolem innym niż HDL oraz na selektywnym
rozpuszczeniu HDL przy użyciu specyficznego detergentu.
W pierwszym odczynniku, nieestryfikowany cholesterol inni niż HDL
poddawany jest reakcji enzymatycznej, w wyniku której uwalniany jest
nadtlenek wodoru, zużywany jako substrat w reakcji peroksydazy z
DSBmT. Prowadzi to do powstania bezbarwnego produktu.
Drugi odczynnik zawiera detergent wybiórczo solubilizujący HDL,
esterazę cholesterolową (CE) oraz chromogeniczny czynnik
sprzęgający, pozwalający na zabarwienie, umożliwiające oznaczenie
stężenia HDL-C.
Jest to metoda przyspieszającego, działającego selektywnie detergentu.
HDL, LDL, VLDL, Chylomikrony
HLD
Detergent działający
selektywnie na HLD
Cholesterol HDL
Przyspieszacz + CO
Cholesterol LDL – nie
DSBmT + Peroksydaza wchodzący w reakcję.
Zaburzony współczynnik cholesterolu HDL
Esteraza cholesterolowa
Oksydaza cholesterolowa
H2O2 + DSBmT + 4-AAP
Peroksydaza
Δ4 Cholestenone + H2O2
Zmiana barwy
(4-AAP = 4-aminoantypiryna, CO = oksydaza cholesterolowa, DSBmT = N,N-bis
(4-sulfobutylo)-m-toluidyna, sól disodowa)
Form-0846 Rev. 3
Metoda ABX Pentra HDL Direct CP jest badaniem jednofazowym,
pozwalającym na bezpośredni pomiar stężenia HDL-C w surowicy lub
osoczu, bez uprzedniego przygotowania próbek, czy wirowania.
HORIBA ABX SAS
BP 7290
34184 Montpellier - cedex 4 - France
S.A.S. au capital de 41.700.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 042 000 42 - APE 332 B
Najnowsza wersja dokumentacji dostępna jest na stronie: www.horiba.com
ABX Pentra
HDL Direct CP
Odczynnikia
Wymagane komponenty niewchodzące w skład produktu
ABX Pentra HDL, Direct CP jest odczynnikiem gotowym do użycia.
• Zautomatyzowany kliniczny analizator biochemiczny: ABX PENTRA 400
• Kalibrator: ABX Pentra HDL Cal, nr ref. A11A01647
• Kontrole: ABX Pentra N Control, nr ref. A11A01653, oraz
ABX Pentra P Control, nr ref. A11A01654
• Standardowy sprzęt laboratoryjny.
Odczynnik 1: Bufor Gooda
Oksydaza cholesterolowa
Peroksydaza
N,N-bis-(4-sulfobutylo)-m-toluidyna,
sól disodowa (DSBmT)
Przyspieszacz
Konserwant
oksydaza kwasu askorbinowego
Odczynnik 2: Bufor Gooda
Esteraza cholesterolowa
4-aminoantypiryna (4-AAP)
Detergent
Konserwant
< 1000 U/l
< 1300 ppg U/l
< 1 mM
< 1 mM
< 0.06 %
< 3000 U/l
< 1500 U/l
< 1mM
<2%
< 0.06 %
Odczynnika ABX Pentra HDL, Direct CP należy używać zgodnie z
niniejszą ulotką. Producent nie może zagwarantować właściwego
działania produktu, jeśli zostanie on użyty w sposób inny od podanego.
Sposób użycia
Wyjmij obie zatyczki kasety i umieść ją w chłodzonej komorze
odczynnikowej analizatora ABX Pentra 400.
Jeżeli odczynnik zawiera pianę, usuń ją za pomocą plastikowej pipety.
Kalibrator
Do celów kalibracji należy używać:
ABX Pentra HDL Cal, Nr ref. A11A01647 (do oddzielnego zakupu)
2 x 1 ml (liofilizat)
Próbka
• Surowica krwi.
• Osocze z zawartością EDTA.
• Osocze z heparyną litową
Te próbki powinny zostać pobrane od pacjenta po 12 - 14 godz.
spędzonych na czczo.
Stabilność(11):
2 dni w temp. 4°C
1 miesiąc w temp -20°C w fiolkach posiadających uszczelki zabezpieczające
przez wyciekiem i wyparowaniem.
2 lata w temp -70 w fiolkach posiadających uszczelki zabezpieczające
przez wyciekiem i wyparowaniem.
• Surowica krwi: Pobierz krew pełną stosując wkłucie dożylne i pozostaw
do zakrzepnięcia. Odwiruj i usuń surowicę najszybciej jak to możliwe
po pobraniu (w ciągu 3 godzin).
• Osocze: Próbki mogą być pobierane z EDTA lub heparyną litową bądź
sodową. Odwiruj i usuń osocze najszybciej jak to możliwe po pobraniu
(w ciągu 3 godzin).
UWAGA: Nie należy używać antykoagulantów zawierających cytrynian.
Zakres odniesienia
Wartość ABX Pentra HDL Cal jest przypisana zgodnie z procedurami
Krajowego Systemu Norm Cholesterolu (National Reference System for
Cholesterol – NRS/CHOL). Materiały kalibracyjne mają stężenia bliskie
stężenia krytycznego dla podjęcia decyzji medycznej.
Każde laboratorium powinno wypracować swoje własne zakresy
odniesienia. Wartości podane w niniejszej ulotce mają wyłącznie
charakter orientacyjny.
Dla cholesterolu HDL w surowicy krwi przewiduje się następujące normy
(13):
Kontrola
Mężczyźni:
Kobiety:
Do wewnętrznej kontroli jakości należy używać:
ABX Pentra N Control, nr ref. A11A01653 (do oddzielnego zakupu)
10 x 5 ml (liofilizat)
ABX Pentra P Control, nr ref. A11A01654 (do oddzielnego zakupu)
10 x 5 ml (liofilizat)
Oznaczenie kontroli należy przeprowadzać raz dziennie i/lub po każdej
kalibracji.
Częstość przeprowadzania kontroli oraz przedziały ufności powinny być
ustalone w oparciu o wytyczne laboratoryjne oraz przepisy obowiązujące
w danym kraju. Wynik kontroli musi zawierać się w zdefiniowanych
przedziałach ufności. Każde laboratorium powinno wypracować sposób
postępowania w przypadku, gdy wyniki wykroczą poza wyznaczone
przedziały.
0,77 - 1,81 mmol/l (30 - 70 mg/dl)
0,77 - 2,19 mmol/l (30 - 85 mg/dl)
• Według amerykańskiego Narodowego Programu Edukacyjnego na
temat Cholesterolu, pożądane są wartości HDL wynoszące
1,033 mmol/l (40mg/dl) lub więcej, wartości równe lub powyżej
1,550 mmol/l (60mg/dl) uważa się za właściwe w profilaktyce choroby
wieńcowej. Wartości poniżej 1,033 mmol/l (40 mg/dl) są istotnym,
niezależnym czynnikiem ryzyka choroby wieńcowej (9).
• Endogenny poziom triglicerydów był w granicach normy do
51,68 mmol/l (2000 mg/dl). Nie należy rozcieńczać próbek, w których
poziom triglicerydów wynosi > 51,68 mmol/l (> 2000 mg/dl).
• Według NCEP dieta czy leczenie farmakologiczne, nie może się
opierać wyłącznie na wyniku jednorazowego badania cholesterolu
HDL.
a.Modyfikacja indeksu od K do L: modyfikacja składu odczynników.
S.A.S. au capital de 41.700.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 042 000 42 - APE 332 B
Najnowsza wersja dokumentacji dostępna jest na stronie: www.horiba.com
ABX Pentra
HDL Direct CP
Przechowywanie i stabilność
Odczynniki w nieotwieranych kasetach zachowują przydatność do użycia
do daty ważności podanej na etykiecie, o ile są przechowywane w
temperaturze 2-8°C i chronione przed działaniem światła.
Stabilność po otwarciu: patrz sekcja „Wydajność przy użyciu w
analizatorze ABX Pentra 400”.
Nie wolno zamrażać odczynników.
Sposób przeprowadzania pomiaru
Opis sposobu przeprowadzania pomiarów przy użyciu urządzeń innych
niż analizator ABX Pentra 400 jest dostępny na życzenie klienta.
Postępowanie z odpadami
Należy postępować zgodnie z lokalnie obowiązującymi przepisami.
Ogólne środki ostrożności
1. Niniejszy odczynnik jest przeznaczony wyłącznie do profesjonalnej
diagnostyki in vitro.
2. Nie zasysać ustami przy pipetowaniu.
3. Kasety odczynnikowe są kasetami jednorazowego użytku, należy je
utylizować zgodnie z lokalnymi przepisami.
4. Należy uważnie zapoznać się z kartą charakterystyki (MSDS)
dołączoną do odczynnika.
Wydajność przy użyciu w analizatorze ABX Pentra 400
Dane przedstawione poniżej pochodzą z oznaczeń przeprowadzonych
przy użyciu analizatora ABX Pentra 400.
Liczba oznaczeń: 240
Stabilność robocza odczynników:
Po otwarciu, kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze
analizatora ABX Pentra 400 zachowuje stabilność przez 31 dni.
Objętość próbki: 2.4 μl/oznaczenie
Wykrywalnośća:
Wykrywalność ustalono zgodnie z zaleceniami procedury CLSI
(NCCLS), EP17-A (20) i wynosi ona 0,05 mmol/l.
Dokładność i precyzja:
• Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia)
Urządzenie przeprowadza 20 razy oznaczenia dla 3 próbek o niskim,
średnim oraz wysokim stężeniu oraz dla 2 kontroli, zgodnie z zaleceniami
procedury Valtec (14).
Kontrola normalna
Kontrola patologiczna
Próbka 1
Próbka 2
Próbka 3
Wartość średnia mmol/l
0.72
1.58
0.80
1.40
2.16
CV %
2.51
1.02
2.72
1.27
0.72
• Powtarzalność (precyzja całkowita)
Urządzenie przez 20 dni (2 serie dziennie) przeprowadza podwójne
oznaczenia dla 3 próbek próbek o niskim, średnim i wysokim stężeniu
oraz dla 2 kontroli - zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura
EP5-A (15).
Kontrola normalna
Kontrola patologiczna
Próbka 1
Próbka 2
Próbka 3
Wartość średnia mmol/l
0.73
1.59
0.88
1.52
2.39
CV %
2.33
1.85
1.97
1.74
1.58
Zakres pomiaru:
Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru zawierający się pomiędzy 0,05
a 4,50 mmol/l.
Liniowość odczynnika ustalono na do 4,50 mmol/l, zgodnie z zaleceniami
CLSI (NCCLS), procedura EP6-A (16).
Korelacja:
79 próbek pobranych od pacjentów koreluje się z komercyjnie dostępnym
odczynnikiem, służącym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI
(NCCLS), procedura EP9-A2 (17). Wartości wahały się od 0,1 do 4,39
mmol/l.
Równanie dla otrzymanej linii allometrycznej wygląda następująco:
Y = 0,95 x + 0,01 mmol/l przy współczynniku korelacji r2 = 0,9921.
Czynniki zakłócające:
Hemoglobina: Nie obserwuje się statystycznie istotnego wpływu do
278 µmol/l
Triglicerydy: Nie obserwuje się statystycznie istotnego wpływu do
7 mmol/l
(jako Intralipid®, świadczący o lipemii)
Bilirubina
Nie obserwuje się statystycznie istotnego wpływu do
całkowita:
483 μmol/l
Nie obserwuje się statystycznie istotnego wpływu do
Bilirubina
bezpośrednia 477 μmol/l
:
GammaNie obserwuje się statystycznie istotnego wpływu do
globuliny:
5000 mg/dl
Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków
oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu
wiedzy wpływają na wyniki tej metody (18,19).
Stabilność kalibracji:
Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest
kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych.
Stabilność kalibracji wynosi co najmniej 14 dni.
Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany
jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza
założony zakres.
Współczynnik konwersji:
mmol/l x 0,387 = g/l
mmol/l x 38,7 = mg/dl
a.Modyfikacja indeksu od K do L: modyfikacja procedury.
S.A.S. au capital de 41.700.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 042 000 42 - APE 332 B
Najnowsza wersja dokumentacji dostępna jest na stronie: www.horiba.com
ABX Pentra
HDL Direct CP
Wersja oprogramowania: 4.4 - Wersja aplikacji: 5.xx
Wersja oprogramowania: 5.0 - Wersja aplikacji: 6.xx
Ostrzeżenie
Użytkownik ma obowiązek sprawdzić, czy niniejszy dokument dotyczy
używanego odczynnika.
Bibliografia
1. Gotto A.M., Lipoprotein metabolism and the etiology of
hyperlipidemia, Hospital Practice, 23; Suppl. 1, 4 (1988).
2. Crouse J.R. et al., Studies of low density lipoprotein molecular
weight in human beings with coronary artery disease, J. Lipid Res.,
26; 566 (1985).
3. Badimon J.J., Badimon L., Fuester V., Regression of
Atherosclerotic Lesions by High Density Lipoprotein Plasma
Fraction in the Cholesterol-Fed Rabbit, Journal of Clinical
Investigation, 1990; 85: 1234-1241.
4. Castelli W.P. et al., HDL Cholesterol and other lipids in coronary
heart disease, Circulation, 55;767 (1977).
5. Barr D.P., Russ E.M., Eder H.A., Protein-lipid relationships in
human plasma, Am. J. Med., 11; 480 (1951).
6. Gordon T. et al., High density lipoprotein as a protective factor
against coronary heart disease, Am. J. Med., 62; 707 (1977).
7. Williams P. et al., High density lipoprotein and coronary risk
factor, Lancet, 1; 72, (1979).
8. Kannel W.B., Castelli W.P., Gordon T., Cholesterol in the prediction
of atherosclerotic disease; New perspectives based on the
Framingham study, Am. J. Med., 90:85, (1979).
9. National Institutes of Health publication No. 93-3095, September,
(1993).
10. Special Communication, Executive Summary of the Third Report of
the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel
on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol
in Adults (Adult Treatment Panel III), JAMA, Vol. 285, No. 19, May
16, 2001, pages 2486 - 2497.
11. Warnick G., Russell, Wood, Peter D., National Cholesterol Education
Program Recommendations for Measurement of High-Density
Lipoprotein Cholesterol: Executive Summary, Clinical Chemistry,
Vol. 41, No. 10, 1427-1433 (1995).
12. Grundy S. M. et. al., Summary of the Second Report of the National
Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection,
Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults
(Adult Treatment Panel II), JAMA 1993, 269; 23; 3015-3023.
13. Tietz N. W., Clinical Guide to Laboratory Tests, W. B. Saunders Co.,
Philadelphia, 1986, p. 256.
14. Vassault A., Grafmeyer D. Naudin C. et al., Protocole de validation
de techniques (document B), Ann. Biol. Clin., 1986, 44, 686-745.
15. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices,
Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A, Vol. 19, No. 2,
february 1999.
16. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods,
Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A, Vol. 23, No.
16, April 2003.
17. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples,
S.A.S. au capital de 41.700.000 € - RCS Montpellier 328 031 042 - SIRET 328 031 042 000 42 - APE 332 B
Approved Guideline, 2nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2, Vol.
22, No. 19, 2002.
18. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4th
Edition, Washington, DC, AACC Press, 1995, 3: 143-163.
19. Young D.S., Effects of
Preanalytical Variables on Clinical
Laboratory Tests, 2nd Edition, Washington, DC, AACC Press, 1997,
3: 120-132.
20. Protocols for determination of limits of detection and limits of
quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A
(2004) 24(34).
Najnowsza wersja dokumentacji dostępna jest na stronie: www.horiba.com